凝乳酶是广泛用于干酪制造业的重要的酶制剂,其产值占全世界酶制剂的15％,其中凝乳效果最好的是小牛皱胃酶。由于世界干酪产量逐年增长,所需凝乳酶数量也在大幅提高,皱胃酶供不应求。同时,欧洲不断爆发的动物性传染病,使消费者对来源于动物的凝乳酶产生恐惧心理,还有一些素食主义者也拒绝食用用小牛皱胃酶生产的干酪,所以近年来各国都在积极寻找皱胃酶替代品。番木瓜凝乳蛋白酶是一种具有凝乳作用的植物凝乳酶,克隆番木瓜凝乳蛋白酶基因,转化益生菌嗜酸乳杆菌,用于干酪生产,对解决凝乳酶短缺及满足特殊人群的需要有重要意义,同时有益于身体健康,也为今后用乳酸菌商业化生产人们所需蛋白奠定了基础。本研究以未成熟的番木瓜(CaricapapayaL.)果实为试材,用Trizol试剂盒提取其总RNA,反转录获得cDNA第一条链,设计特异引物,引入SacI和XbaI双酶切位点,优化PCR条件,扩增出目的条带,连接到pMD18-Tsimplevector克隆载体,获得重组载体pMD18T+,经测序并与GenBank上公布的番木瓜凝乳蛋白酶基因(AJ131996)序列比对,其相似性达98%。以SacI和XbaI分别双酶切克隆载体pMD18T+与表达载体pMG36e,回收目的基因片段和载体片段,连接获得含有木瓜凝乳蛋白酶基因的重组表达载体pMG36e+。活化受体菌株嗜酸乳杆菌(LactobacillusacidophilusATCC4356),优化电脉冲转化法参数,转化获得6个转化子,经酶切和PCR鉴定,重组质粒已成功转入嗜酸乳杆菌(L.acidophilusATCC4356)。