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基因的调控表达具有组织特异性。为探讨油松胚珠雌配子体发育中基因在单倍体和二倍体组织中的表达差异性,本研究应用激光显微切割技术(LMD)从游离核时期胚珠中分离雌配子体和周围的二倍体组织,运用线性扩增法对所提取的极微量组织RNA进行大量扩增,分别从雌配子体和周围二倍体组织中获得RNA 4.70 μg及6.08μg,并构建cDNA文库,获得滴度为1.71×107pfu/mL和1.81×107pfu/mL的两个对应文库。从随机测序的227个文库单克隆中获得156 ESTs, BlastN分析显示62.82%的EST与已知针叶树的EST序列具有显著相似性：BlastX比对结果显示76.28%的EST为未知基因转录,仅23.72%具有功能注释,蛋白质功能明确的有10个,其中核糖体蛋白L7a (ribosomal protein L7a)、类泛素蛋白(Ubiquitin-like protein)和Rab型小GTP结合蛋白(Rab-type small GTP-binding protein)等7种同源蛋白质在雌配子体中特异表达,类金属硫蛋白(Metallothionein-like protein)在配子体周围二倍体组织中特异表达,DnaJ蛋白(DnaJ-like protein)和脱水素(Dehydrin)在雌配子体和周围二倍体组织中均表达。应用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)分析了油松核糖体蛋白质L7a(PtRPL7a)的表达情况,发现在油松可育系胚珠中,游离核前期PtRPL7a的表达部位为整个胚珠,到了游离核中期仅在雌配子体内表达,游离核后期的表达则出现在雌配子体的周围二倍体中,而不育系胚珠的游离核各个时期均无PtRPL7a表达,推测该基因的表达缺失可导致油松胚珠败育。本研究为油松胚珠发育调控基因组织特异表达的研究提供了一套基于LMD和RNA线性扩增技术的新方法。利用该方法,成功将雌配子体与周围二倍体组织分离,从中获得优质的RNA,筛选到一些在油松胚珠雌配子体和周围二倍体组织表达不同的基因,并确定PtRPL7a基因在胚珠发育阶段的表达具有时空特异性,且与油松雌性不育的形成密切关联。