鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引发的急性、高度接触性传染性疾病。它可以导致感染鸡体产生一定程度的免疫抑制,从而进一步加大了经济的损失,目前为止随着变异毒株以及超强毒株的出现,传统的疫苗所起作用逐渐降低,因此研制出一种新型疫苗具有重要的实际意义。其中VP2蛋白是传染性法氏囊病毒的保护性抗原,成为了研发新型疫苗如基因工程亚单位疫苗的首选目的蛋白。目前为止以VP2蛋白为主的亚单位疫苗在生产实践中均未得到广泛的推广应用,主要的原因有是否可以形成可溶性表达蛋白,加工工艺成本以及所配制的疫苗攻毒保护率等方面所出现的难点。因此本文为研制出一种价格成本较低,攻毒保护率较高的基因工程亚单位疫苗开展相关试验研究。本试验主要利用酵母源SUMO基因和VP2基因连接至原核表达载体pETDuet-1中构建重组质粒,将其转化至不同感受态细胞中,验证正确后进行诱导表达,从中筛选出所适用的感受态细胞,最佳的培养温度、诱导浓度以及时间,从而选出最优的表达菌种为后续试验做准备;然后利用所选的最优菌种进行大量培养获得足够的菌体沉淀,利用PBS重悬后使用高压均质机破碎菌液,将所得到的破碎菌液分别利用亲和层析镍柱和硫酸铵沉淀两种不同的方法进行纯化试验。对亲和层析镍柱纯化后所得的蛋白液进行超滤处理,对硫酸铵沉淀纯化后所得的蛋白液进行透析处理,再将两种处理后的蛋白液利用Triton X-114进行内毒素的去除试验,从中摸索出较为适合的去除内毒素的作用条件。同时摸索灭活工艺的试验,选用传统方法的甲醛以及二乙烯亚胺(BEI)进行对蛋白液的灭活,最终选用最佳方法对蛋白液进行灭活后与相应的油佐剂按照一定比例配制疫苗,将所配制的疫苗进行稳定性检验和无菌检验;最后将所配制的疫苗免疫21日龄的SPF鸡进行动物试验,通过安全性检验选择出最佳效价蛋白液进行后续试验,再使用该效价的蛋白液进行效力检验以及攻毒保护性试验全面验证自制疫苗的免疫效果,及对鸡体是否有副作用和增重等方面的影响进行试验研究。本文研究发现,选用的最优菌种Duet-2号菌种所表达的蛋白为可溶性蛋白,经蛋白免疫印迹实验(Western-Blot)验证后符合预期结果。经纯化工艺的摸索发现本试验所用的亲和层析以及硫酸铵沉淀均可获得目的蛋白,使用TritonX-114反复处理样品后内毒素含量均小于1000 EU/mL,符合相关质量标准,证明利用本方法可有效去除内毒素,且对蛋白效价无显著影响。经过两种灭活试验的对比最终选用甲醛进行灭活试验,将灭活后的蛋白液与油佐剂进行一定比例的混合后配制疫苗验证其稳定性合格无菌检验成立可用于后续实验。最后使用本文中所配制的疫苗进行动物实验,结果发现,1:16(粗纯)疫苗组与1:16疫苗组的保护率均可达到80%起到良好的保护效果。综上所述,本试验得到了可溶性表达的菌种Duet-2号菌,利用本菌所表达的目的蛋白制备疫苗后免疫SPF鸡均可起到良好的保护作用,其中1:16(粗)疫苗组与1:16疫苗组保护率均为80%,1:16(粗)可在很大程度上降低生产成本,同时利用硫酸铵沉淀进行纯化操作较为简单,对所需设备要求较低。后续可以对1:16(粗)疫苗组进行深层次,多方面,重复性试验验证试验验结果。为基因工程亚单位疫苗广泛的应用推广提供理论支持。