干酪乳清中乳蛋白分离纯化的研究

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乳清是工业生产干酪的副产物,含有丰富的营养物质及生物活性成分。近年来,随着我国干酪产量的不断增加,产生大量的乳清废水,这不仅污染环境,而且造成巨大的浪费,因此,干酪乳清的处理与深加工成为制约我国干酪产业发展的瓶颈。本论文进行干酪乳清中乳清蛋白和乳铁蛋白分离纯化的研究,主要工作包括:热钙法预处理干酪乳清,利用超滤技术从干酪乳清中回收乳清蛋白以及离子交换色谱法分离纯化高纯度的乳铁蛋白。本课题采用热钙法对干酪乳清进行预处理,以减小乳清混浊度,提高后期超滤效率。通过单因素试验,确定预处理最佳工艺为:向乳清中加入0.28%的CaCl2,调节pH至6.67.0,在50℃下加热,沉淀絮状杂质,最终在4℃下离心获得澄清的乳清,结果表明,在此条件下,干酪乳清中脂肪含量减少90%,混浊度(500nm吸光值)由2.74降低至0.07。采用分子截流量为10000Da的聚醚砜超滤膜,分离干酪乳清中总的乳清蛋白,首先通过单因素实验确定超滤试验中影响膜分离的压力、温度、料水比、pH值等技术参数范围,然后选择压力、料水比、pH值进行L9(33)正交试验,结果表明,超滤的最佳条件为:压力30psi,料水比21,pH6.0,在此条件下,膜的透水通量为32.66L/hm2,乳糖脱除率为93.13%,蛋白截留率为94.65%。利用离子交换色谱技术从干酪乳清中分离纯化乳铁蛋白,以前期超滤获得的乳清蛋白浓缩液为原料,经填装CM-Sepharose fast flow阳离子交换树脂的离子层析柱进行分离。通过对离子层析过程的条件进行优化,确定最佳工艺为:前期处理过的干酪乳清加入经过磷酸盐缓冲液(pH8.0)平衡的树脂中,分别选择0.3mol/L和0.8mol/L NaCl进行阶跃洗脱,在此条件下,将洗脱液透析冻干,经SDS-PAGE电泳及Bandscan软件分析,产品纯度为93.6%,回收率为29.56%。同时,采用Western Blotting法证明所分离纯化的样品与乳铁蛋白标品具有相同的免疫原性。
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