Hrp(hypersensitive response and pathogenicity,Hrp)基因广泛存在于植物病原细菌中,参与Hrp极毛系统的组装,不仅可运输效应蛋白至植物细胞,导致HR(过敏性反应)或抗病性,还可运输致病性和毒性蛋白或抑制子活性物质,引起植物病害。hrp基因多串联成簇且相当保守,在诱导培养基或植物体内,基因簇中的hrpA基因编码细菌表面附属物-Hrp极毛的结构蛋白HrpA。Hrp极毛在植物-病原细菌互作中扮演十分重要的角色。病原细菌能否使亲和性植物发病与其是否有Hrp极毛有直接的关系。在对hrp基因进行深入研究的基础上,我们尝试设计新的化学药剂和抗体阻止HrpⅢ型分泌系统的组装或致病毒力蛋白因子的分泌运输,从而有效限制植物细菌病害的发展。本研究以丁香假单胞菌番茄变种DC3000(Pseudomonassyringae pv.tomato DC3000)hrp基因表达的工程蛋白HrpA/Ps作为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆杂交瘤细胞抗体,然后从杂交瘤细胞系中提取RNA,反转录合成cDNA,并以此为模板,PCR扩增获得全套抗体的可变区基因,利用从PQY1.5质粒扩增出一柔性肽段(Linker)连接成基因工程单链抗体(single chainvariable fragment,scFv),再通过基因工程方法,将scFv与噬菌粒pCANTAB-5E连接,转化大肠杆菌TG1菌株,获得单链抗体噬菌体文库,以便利用噬菌体展示技术对抗体库进行淘选,获得了HrpA特异性的单链抗体。以单克隆抗体为来源的单链抗体,亲和力和特异性都较好,可以为进一步进行植物抗病基因工程和植物抗体研究提供基因来源。