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针对转Bt毒素蛋白基因抗虫植物及Bt毒素蛋白制剂的应用在的生态安全风险以及对人类和其它哺乳动物的安全隐患，课题以Bt Cry1B毒素蛋白为对象，从人源化Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选具有Cry1B毒素蛋白结合活性的噬菌体单链抗体，并进行可溶性表达，建立了Cry1B毒素蛋白的酶联免疫吸附技术(Enzyme LinkedImmunosourbent Assay，ELISA)和时间分辨荧光免疫分析存技术(Time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)免疫学检测方法。 经4轮富集筛选并鉴定，成功筛选获得8个具有Cry1B毒素蛋白结合活性的阳性噬菌体单链抗体菌株，其差异主要存在于单链抗体的CDR区氨基酸。 取1E2号噬菌体单链抗体菌株(ELISA值最高)做为可溶性表达材料，通过宿主替换的方式重组噬菌体单链抗体基因至E.coli HB2151宿主细胞中进行可溶性表达，纯化抗体蛋白并检测活性。PCR、DNA电泳及基因测序等结果证实重组噬菌体对E.coli HB2151宿主菌侵染成功，SDS-PAGE表明scFv抗体表达成功，纯化后的蛋白浓度为132μg/mL。在培养温度30℃，1 mmol/L IPTG诱导条件下，单链抗体在E.coli HB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12h。 将1E2号重组噬菌体单链抗体基因克隆导入pFastBacTMHT-A载体，构建pFastBacTMHT-A-scFv重组质粒，化转DH10BacTM E.coli感受态细胞，进行蓝白斑筛选，提取白斑菌落中的重组Bacmid-scFv杆状病毒质粒侵染sf9昆虫细胞，进行真核表达，纯化抗体蛋白并检测活性。实验结果表明pFastBacTMHT-A-scFv重组质粒构建成功，阳性克隆菌株中存在完整、正确单链抗体基因;重组Bacmid-scFv杆状病毒质粒侵染sf9昆虫细胞后，细胞发生明显病变特征，ELISA、SDS-PAGE及Western blotting检测均证实单链抗体蛋白在昆虫细胞中表达成功，纯化后测定其表达量为103μg/mL。 分别以三种形式的单链抗体建立针对Cry1B毒素蛋白的间接竞争性ELISA法测，以原核表达的单链抗体和抗Cry1B多抗作为检测抗体建立针对Cry1B毒素蛋白的双抗夹心TRFIA检测方法。经抗原的间接竞争ELISA法测定:Cry1B毒素蛋白对融合形式单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.075μg/mL，最低检测线IC10为13.4 ng/mL，线性检测范围在0.5～4.0μg/mL之间;对原核表达单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.398μg/mL，最低检测限(IC10)为25.7 ng/mL，线性检测范围为0.5～4.0μg/mL;对真核表达单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.010μg/mL，最低检测线(IC10)为11.3 ng/mL，线性检测范围为0.5～10.0μg/mL。用原核表达的单链抗体建立针对Cry1B毒素蛋白TRFIA的检测方法显示，标准检测曲线灵敏度为0.17 ng/mL，线性测量范围在1.0～800 ng/mL，无抗原类似物的交叉反应。 结论:本试验以真核系统表达的单链抗体建立的间接竞争性ELISA检测方法和以原核系统表达的单链抗体建立的双抗夹心TRFIA检测方法，在抗原检测灵敏度上均已接近商品化试剂盒的检测要求，这为后期开发具有针对Cry1B毒素蛋白快速检测试剂盒提供了条件。