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目的:将重组骨形态发生蛋白7真核表达质粒(pcDNA3.1-BMP7)转染至体外培养的兔骨髓间充质干细胞中,测定BMP7基因在该细胞中的表达。
方法:BMP7基因序列测定,拼接后与报道的BMP7基因序列对照分析;脂质体介导pcDNA3.1-BMP7重组质粒转染骨髓间充质干细胞,G<,418>筛选14天,Westernblot、RT-PCR、原位杂交检测BMP7基因的表达。
结果:序列测定证实与基因BANK报道的BMP7全长基因序列一致;转染pcDNA3.1-BMP7质粒并由的骨髓间充质干细胞,G<,418>筛选14天, Western blot检测发现18KD位置上有蛋白表达;RT-PCR检测到1.3Kb DNA条带;原位杂交检测可见细胞核周围呈棕褐色。未转染pcDNA3.1-BMP7质粒的骨髓间充质干细胞无上述结果出现。
结论:脂质体介导下,重组真核表达载体pcDNA3.1-BMP7能被转染骨髓间充质干细胞,且表达了BMP7蛋白及BMP7mRNA。