头孢菌素发酵过程中关键酶及植物油作用机理研究

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头孢菌素C是由顶头孢霉菌产生的β-内酰胺类抗生素。目前顶头孢霉菌的发酵主要以葡萄糖和植物油为碳源,但植物油利用率低下、价格偏高等问题一直制约着头孢菌素行业的发展。本课题从植物油对头孢菌素的影响、植物油预处理方案和植物油代谢途径中的关键酶等三个角度出发,对提高植物油利用效率,增产头孢菌素的方法进行了研究。通过气质联用分析了橄榄油、花生油、大豆油和调和油的脂肪酸组成,比较了四种植物油脂肪酸组成的差异,发现调和油中的亚油酸含量明显高于其他三种油,而橄榄油中的油酸含量明显高于其他三种油。根据四种油对头孢菌素产量和菌体生物量的影响情况可以推测,在植物油包含的脂肪酸中,油酸可能具有提高顶头孢霉菌生物量的作用,而亚油酸则可能具有增产头孢菌素的作用。对植物油的酶解条件进行响应面分析得到了豆油酶解的最优条件,此时豆油的酶解率达到了83.29%。将在最优条件下酶解后的植物油添加到顶头孢霉菌的发酵培养基中,经过HPLC检测发现头孢菌素的产量提高了51%。在发酵培养基中添加双氧水后,检测了α-酮戊二酸脱氢酶和过氧化氢酶的酶活性,与头孢菌素和α-氨基己二酸变化曲线进行了对比,结果表明添加双氧水后α-酮戊二酸脱氢酶的酶活降低显著,过氧化氢酶活性提高4.8倍。头孢菌素和α氨基己二酸合成量明显增加。通过取样、提取总RNA、反转录和荧光定量PCR,检测了ogdh和pcbAB的基因表达量变化。结果发现双氧水的胁迫在一定程度上会降低了ogdh的表达。头孢菌素前体量的提高诱导了pcbAB基因的表达量。由此推测,双氧水的添加直接或间接的影响了α-酮戊二酸脱氢酶和过氧化氢酶体的状态,并最终提高了头孢菌素的产量。
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