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人工全髋关节置换及股骨骨折髓内针内固定为临床广泛接受的手术,其并发症肺脂肪栓塞一旦发生常可导致病人死亡。最近的研究显示,肺脂肪栓塞广泛存在于所有此类病人,但为何只有少数病人有临床症状(<30%),原因不清。为深入研究,我们通过扩髓及髓腔内固定法建立了大鼠肺脂肪栓塞模型,探讨临床脂肪栓塞后肺病理变化的特点。 材料和方法 1.动物模型制备 选用雄性Sprague-Dawley SPF大鼠,体重350-410克(12-14周)80只(购自日本国秋田大学动物实验中心),随机分为休克扩髓组、扩髓组、休克组及对照组。精选满足实验要求者,休克扩髓组(7只)、扩髓组(8只)、休克组(7只)及对照组(5只)。 大鼠在实验前均禁食12h,自由饮水。实验全部过程采用无菌操作。腹腔内注射麻醉剂戊巴比妥钠(33mg/kg)(Abbot Laboratories,North Chicago,USA)15min后,再经阴茎静脉注射戊巴比妥钠(33mg/kg)。颈部正中切口,左侧颈动脉及右侧颈静脉插管,出血量要求少于0.5ml。左侧颈动脉连接血压监测仪,右侧颈静脉连接持续输液系统,以补充实验中液体丢失及维持静脉麻醉(戊巴比妥钠3.3mgkg-1min-1-6.6mgkg-1min-1)。静脉输液总量14-16毫升。在经颈静脉插管给予的液体中加入注射用肝素(3.7ml),颈动脉插管用肝素(3.98u/ml)间断冲洗。两层缝合颈部切口并固定插管,稳定30min,血压平稳后开始实验。 休克扩髓组及休克组在0min采用颈动脉放血10min使血压达到50mmHg,放出的血液(含0.2ml3.7u/ml肝素)保存于4℃冰箱内,然后使大鼠处于自然恢复状态50min,60min时将10min前取出、复温后的原血输回(10min),恢复到120min。此时休克扩髓组及扩髓组进行扩髓、髓腔内固定(30min)。 大鼠观IJ卧位,手术采用邓规转子窝上小切口,约1厘米长。锐刀切断大转子及转子窝处抵止的肌增,暴露转子窝,用骨锥在其上造成小粗糙面,以1百毫米骨钻扩大髓腔,1.2毫米髓内钉打入,两层缝合切日。 观察时间 为255删,分别在0、60、no、150、1“、1的及255m取动脉血行血气分析检查。并分别于 0. 255nfl时取动脉血测定WBC、RBC。P LTLT、HGB等。255规时,以过量戊巴比妥钠D0mg/ml)处死动物,先取动物左肺放入液氮内保存,以备髓过氧化物胸川yeloperokidase,WO)测定。再用20%福尔马林行右肺涨注,取大鼠右肺,在”%福尔马林中保存。实验后拍现地股骨正侧位X线片以排除骨折的发生。对照组除未断了骨钻扩髓及髓腔内固定外,同实验组。肺脏标木行常规HE染色,光镜检查。采用半定量计数的方法对每一标本每个切片的全部视野在10O倍率显微镜下进行帅损伤的评分。2。MPO测定 将手术切除的左肺从液氮内随机分批取出,以生理盐水冲洗器官表面的血液,用滤纸沾干,称重,Virtishear匀浆机在4In 20 InM磷酸盐缓冲浪中 (pH 7.4)匀浆化 30 s,再用 Beckinan L-80超速离心机 4万怖分、4℃离心30 llin。沉淀物在 4毫升 50 InM磷酸盐缓冲液中…H 6、0)丑0 OC保存,次日将冷冻标本融化,朋超声匀浆机全速超声乳化 90 S,60℃水浴内孵化 2 h,1.4万输分离心 10 mm,取上清液 25pl加入到 725pl磷酸盐缓冲液中 …H 6.0),使用分光光度计(波长 460。)测量 4 mn,30 S记录一次。Al,O活性(山g湿组织)二(A460)(13.5)/组织湿重。A460是460urn 条件下30 S到 4 nun吸收率的变化。系数 13.5山经验确定。门 单位 MPO活性是减少llllllol过氧化物/分钟所需酶量*3.肺损伤评分方法1).骨碎片、骨髓脂肪细胞栓塞的肺动脉血管评分方法。0分:未见有栓塞的肺动脉血管门分:栓塞的肺动脉血管数1-IO条;2分:栓塞的肺动脉血管数10条以上。2)肺内血管白细胞栓子评分方法。0分:未见白细胞栓于;l分:1-4个白细胞栓子;2分:5个以上白细胞栓子。3).血管周围水肿厂’水肿袖”)评分方法。0分:0一 个伴有”水肿袖”的血管门分:引一0O个伴有”水肿袖”的血.管;2分:IO]个以上伴有”水肿 2袖”的血管。4).肺泡水肿评分方法,按肺泡水肿面积占切片全面积的百分比计算。0分:未见肺泡水肿;l分:l刁o;2分:11O以上。5).肺泡扩张破坏面积占切片全面积的百分比评分方法对分:少于25%;l分:26-39%;2分:40%以上。 按以上方法分别记录每只大鼠右肺三叩你十的各个单项评分,三个肺叶的值平均后得出该大鼠单项评分,然后将一共5个单项分数相加即为该大鼠肺损伤分数。I 结 果 所有动物在实验中全部存活,满足本实验要求(出血量要求少于0.sml,双侧股骨正侧位X线片无骨折发生人各组动物肺脏大体形态均无变化。显微镜下观察典型改变为肺小动脉及毛细血管管腔内充满骨髓干细胞及脂肪球,在动物肺动脉血管内皮细胞下方发现脂肪,而对照组均未见。 采用SPSS统计软件对实验数据行方差分析及秩和检验。统计显示不考虑