本试验采用不同方法对犊牛睾丸支持细胞进行体外分离培养，分析其最佳分离纯化方法。通过冻存试验，观察支持细胞冻存后恢复情况。检测并比较支持细胞及其条件培养液对犊牛PBMC及小鼠脾细胞转化的影响。获得如下结果： 1分别采用Ⅰ、Ⅳ型胶原酶与胰蛋白酶相结合对犊牛睾丸进行次第消化，证明采用1g/L的Ⅳ型胶原酶消化10 min、2.5 g/L的胰蛋白酶消化8 min的消化方法消化犊牛支持细胞所用的时间最短，得到的细胞数量较多，细胞活力在95％以上。 2犊牛睾丸支持细胞在培养3 h～4 h后开始贴壁，5 h换液，能够去除大部分精原细胞，24 h后，用20 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0)对细胞进行3 min～5 min的低渗处理，能够去除残存的精原细胞48 h后，细胞基本铺成单层。分离得到的犊牛支持细胞经过液氮冻存21 d后，取出培养，细胞能够正常生长。 3犊牛睾丸支持细胞在培养3 d～4 d，相邻细胞有紧密连接，细胞融合成片，铺成膜状单层，胞质中可见较多的颗粒状物质或空泡。经过Feulgen染色后，可见细胞核内的卫星核小体，SABC免疫组化染色可见支持细胞胞浆及胞膜呈黄染，为FasL阳性表达。 4犊牛睾丸支持细胞对淋巴细胞活性影响实验证明，支持细胞可显著抑制犊牛和小鼠淋巴细胞的转化。同时证明，支持细胞可直接或通过旁分泌发挥上述作用。通过在两种类型细胞间铺琼脂糖，建立了一种新的共培养方法。 通过本次试验，建立了一种简单、易行的犊牛Sertoli细胞分离培养方法，为支持细胞的深入研究奠定了基础。通过测定Sertoli细胞及其条件培养液对淋巴细胞的抑制作用，为揭示睾丸支持细胞在局部免疫豁免调节中的作用提供试验依据。建立了一种新的共培养方法，有利于今后共培养方面的研究。