BAG-4在中国卤虫胚胎发育过程中的表达模式

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卤虫(Artemia)又称盐水丰年虫、盐水丰年虾等,是一种小型的甲壳动物,广泛分布于欧州、亚洲、北美州、中美州和非州。中国卤虫资源十分丰富,分布广泛,在内蒙、新疆、渤海湾、辽东湾、莱州湾等地的盐田和青藏高原的盐湖分布较为集中。中国卤虫具有高不饱和脂肪酸、高蛋白的特点和易于保存和发育快速等独特的繁殖特性,成为鱼虾苗种生产的饵料,并且是一种研究胚胎发育的较好的实验材料。BAG蛋白家族也称为Bcl-2(Bcl-2-associated athanogene)B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白家族,是近年来发现的一种抗凋亡的蛋白家族,其分泌的蛋白可与热休克蛋白70的ATP酶结构域结合并调控各种生理过程。BAG蛋白家族中发现的一个死亡结构域抑制因子被命名为BAG-4,又叫做死亡结构域沉默因子。它可以与肿瘤坏死因子受体-I(TNFR-I)的死亡结构域结合,从而阻止死亡受体与细胞凋亡信号蛋白结合,致使TNFR-I凋亡的通路被阻断,抑制细胞凋亡。中国卤虫在受到外界环境胁迫的过程中存在滞育现象,长期滞育会致使细胞凋亡、胚胎死亡。BAG-4属于卤虫胚胎发育过程中与细胞凋亡调控相关的蛋白,目前为止全世界对中国卤虫BAG-4的研究未见报道。本研究将首次对BAG-4结构、功能及其在中国卤虫胚胎发育过程中的表达模式进行了研究,具有重要意义。本研究采用整体免疫组化的实验方法对中国卤虫不同发育时期BAG-4表达部位情况进行了定位研究。实验结果显示,发育至0小时、5小时和10小时的卤虫胚胎一端有明显的阳性表达;发育至15小时,无节幼体前端有微量表达;发育后期的20小时、40小时、3天和5天的卤虫BAG-4蛋白主要以头胸部和尾部表达为主,其中头部最为集中。随着卤虫的早期胚胎发育,在头部表达越来越明显。采用组织切片免疫组化实验方法对卤虫不同发育时期BAG-4表达部位情况分析,发现其阳性表达部位与整体免疫组化的实验结果基本相同。利用免疫印迹法对卤虫不同发育时期BAG-4蛋白的表达量进行了研究。经WesternBlot检测发现,相同温度、相同盐度、相同光照强度下培养的卤虫在不同发育时期BAG-4蛋白表达量变化呈先升高后下降的趋势,其中10小时和15小时BAG-4表达量较高。说明BAG-4主要在卤虫胚胎发育前期具有较高的表达量。取发育15小时的卤虫,发现在不同盐度胁迫条件下,其BAG-4表达量随盐度的升高而升高,呈递增趋势。当盐度达到200‰有所下降,证明盐度的升高能够增加BAG-4的表达量。综上所述,BAG-4广泛分布于卤虫的各个部位,能够参与中国卤虫早期胚胎发育过程,并在盐度胁迫时出现高水平的表达,这可能与BAG-4通过参与TNFR-I信号通路抑制细胞凋亡有关。
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