论文部分内容阅读
背景： 恶性肿瘤是引起人类死亡的第二大病因.化疗是大多数肿瘤的首选治疗方法,但是由于肿瘤组织生长迅速,经常发生缺血坏死,导致肿瘤血流灌注差而化疗药物在肿瘤组织中不能充分的释放,从而产生化疗抵抗,这是化疗效果不理想的主要原因之一.因此,提高肿瘤组织的血流灌注对于促进化疗释药可能具有很大的帮助,这对于增敏化疗和降低化疗抵抗具有很大的意义. 超声激励微泡产生的一系列生物学效应可增加血管的通透性,促进药物从血管中外渗.本实验组在前期的实验中发现,机械指数(MI)为0.3的诊断超声联合微泡治疗可增强兔VX2肿瘤的血流灌注,并使肿瘤组织中阿霉素的浓度升高.为进一步探讨诊断超声激励微泡对肿瘤血流灌注的影响,本实验采用MI为0.3的诊断超声联合微泡对大鼠皮下Walker-256肿瘤进行治疗,并观察肿瘤血流灌注、肿瘤组织阿霉素荧光强度、肿瘤组织药物浓度等.同时,为观察血流灌注改变的持续时间,本实验进一步采用MI为1.0的诊断超声联合微泡对兔VX2肿瘤进行治疗,观察其在不同时间点上的血流灌注情况. 目的: 1、探讨诊断超声联合微泡治疗对大鼠Walker-256肿瘤血流灌注的影响,并进一步探讨对阿霉素在肿瘤内的释放和分布的影响. 2、探讨诊断超声联合微泡治疗对兔VX2肿瘤血流灌注影响的持续时间. 材料和方法: 1、实验材料: (1)仪器设备:新型VINNO70彩色超声多普勒诊断仪(飞依诺科技有限公司,苏州),X4-12L高频线阵探头,频率4~12 MHz;配备微泡超声空化调控功能(即Vflash功能),具有可变焦域的弱聚焦式超声发射功能. (2)实验动物: ①健康雄性SD大鼠10只,8周龄,体重190-210g,由陆军军医大学第二附属医院提供. ②健康雄性新西兰大白兔10只,体重1.8-2.2Kg,由陆军军医大学第二附属医院动物实验中心提供. (3)实验试剂: "脂氟显"脂质微泡,由陆军军医大学第二附属医院超声科自制,振荡后为凝乳状液体,核心气体为全氟丙烷,平均粒径 2μm,浓度约4×109~10×109/ml. 2、实验方法: (1)诊断超声联合微泡对大鼠Walker-256肿瘤的血管效应及释药研究:健康雄性SD大鼠10只,双侧大腿接种肿瘤成功后,随即配对分组为治疗组(n=10),对照组(n=10).超声治疗参数为MI 0.3,脉冲重复频率(PRF)10 Hz,脉冲长度8个周期,脉冲时间为2.4s,间歇时间2s,治疗时间15min.0.04ml"脂氟显"微泡稀释于1ml生理盐水中并在超声治疗过程中注射.治疗前先静脉注射阿霉素溶液(30mg/kg).治疗前后超声造影(CEUS)并采集数据,并利用超声造影分析软件得出峰值强度(PI)和曲线下面积(AUC).取实验标本进行HE染色.制作冰冻切片后在激光共聚焦显微镜下观察阿霉素荧光,利用高效液相色谱检测肿瘤组织阿霉素药物浓度. (2)诊断超声联合微泡增强肿瘤血流灌注持续时间的研究:健康雄性新西兰大白兔10只,单侧大腿内侧种植VX2肿瘤成功后进行超声联合微泡治疗.0.05ml微泡稀释于5ml生理盐水中用于治疗.超声参数为MI 1.0,PRF 10 Hz,脉冲长度8 cycle,脉冲时间为2.4s,间歇时间2s,治疗时间15min.治疗前以及治疗后10min,30min, 1h,2h,24h分别进行超声造影检查,并分析其时间强度曲线(TIC),获得PI值和AUC值. 结果: 1、诊断超声联合微泡对肿瘤血流灌注及释药的影响:超声治疗前后造影视觉评价,血流灌注变得丰富的有6例(60%),血流灌注无明显变化的有4例(40%).造影分析软件定量分析后显示实验组PI值及AUC值都较对照组显著上升(P<0.05).治疗组的Dox药物质量浓度为(1.15±0.25)ug/g ,对照组为(0.96±0.21)ug/g,治疗组药物浓度相对于对照组提高了20%,差异具有统计学意义(P<0.05).病理结果中实验组未见明显的异常.激光共聚焦显微镜下观察可见超声治疗组相对于对照组荧光强度更强,分布范围更广泛. 2、诊断超声联合微泡对肿瘤血流灌注影响的持续时间:超声治疗后10min,30min, 1h的PI值分别为(85.71±19.82)、(85.21±17.84)、(81.89±17.15)均显著高于治疗前PI值(72.69±16.54)(P<0.05),AUC值分别为(3271.77±730.81)、(3182.09±716.14)、(3071.03±657.46)均显著高于治疗前AUC值(2778.00±579.85)(P<0.05);然而在2h和24h时,PI值分别为(72.98±17.06)、(73.23±18.09)与治疗前PI值比较均无显著差异(P>0.05),AUC值分别为(2731.82±636.56)、(2749.97±704.40)与治疗前AUC值比较均无显著差异(P>0.05). 结论: 1、诊断超声联合微泡治疗可以增强肿瘤局部的血流灌注,并可以促进化疗药物在肿瘤组织中的释放. 2、诊断超声联合微泡治疗增强肿瘤血流灌注的持续时间大约为1-2h.