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生物体内的许多系统都与血压形成有关,而肾素-血管紧张素系统(RAS)和激肽-激肽释放酶系统(KKS)是两个重要的血压调节控制系统。在这两个系统中,血管紧张素转化酶(ACE)起着重要的调节作用。ACE抑制剂可使血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)转化为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),从而起到降压的作用。目前,大多数用于治疗高血压的药的ACE抑制肽类药物,物都是人工合成的,虽然降压效果明显,但是副作用大,利用乳酸菌开发制备ACE抑制肽虽然效果不及人工合成,但其安全性较高,并对血压正常者无降压效果,现已成为研发的重点,具有安全降血压的作用。
实验一:本实验对实验室保存的9株保加利亚乳杆菌的基本生长特性及ACE抑制率大小进行比较,用于对出发菌株的生产性能充分了解。结果表明,不同菌株凝乳的致密性、滴定酸度、生物量等存在较大的差异,不同菌株个体间的ACE抑制活性差异也较大,通过对四株产ACE抑制肽活性较高的菌株研究发现,其共同点是具有较高的滴定酸度并且在发酵乳中生长良好。
实验二:利用N+注入技术对保加利亚乳杆菌进行诱变,以ACE抑制率为指标进行选育,以获得高产突变菌株。当N+注入能量在20KeV,剂量设定为五个梯度,分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5×1015ions/cm2。结果表明,随着注入量的增加,其菌株存活率呈“马鞍型”曲线。通过试验,确立最佳离子诱变参数为:能量为20KeV,剂量为1.5×1015ions/cm2,在此条件下获得了四株高产菌株M601、M602、M603、M606,并通过稳定性试验,获得高产菌株M602-4-1。
实验三:通过L9(34)正交实验设计,研究不同的脱脂乳浓度、接种量、发酵时间和发酵温度对高产菌株M602-4-1产ACE抑制肽的影响,确立高产菌株最佳培养条件。在此基础上,设计五种不同氮源配比的培养基,根据高产菌的生长特性,确立最佳培养基命名为MRS-N3,在此培养基上菌株的生长优于MRS培养基。
实验四:高产菌株M602-4-1与出发菌株M602生长性能的比较。通过对生物量、滴定酸度、粘度以及形态方面进行对比,对诱变前后菌株经行对比。实验结果证明,诱变后的高产菌株无论在生物量、滴定酸度、粘度方面均有提高,在形态上有较大的改变。