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目的:分别观察Ag85A DNA疫苗和Ag85B DNA疫苗对移植性小鼠膀胱肿瘤的免疫治疗作用,探讨其在体内的作用机制。方法:扩增前期已经制备成功的分别含有pcDNA3.1-Ag85A和pcDNA3.1-Ag85B的细菌(E.coli JM109),从中大量提取相应重组质粒,并经琼脂糖凝胶电泳鉴定。取1×10~6BTT739小鼠膀胱肿瘤细胞接种于T739小鼠左后肢内侧皮下,建立移植性小鼠膀胱肿瘤模型。并将40只荷瘤小鼠随机分为生理盐水组、空白质粒(pcDNA3.1)组、卡介苗(BCG)组、Ag85A DNA疫苗(pcDNA3.1-Ag85A)组和Ag85B DNA疫苗(pcDNA3.1-Ag85B)组,每组8只,雌雄各半。荷瘤第7d、14d和21d,于小鼠右后肢肌肉注射给药。荷瘤第7d开始至第28d处死小鼠,每3d测量一次肿瘤长径与短径,并依据公式计算肿瘤体积,同时观察荷瘤小鼠毛色、食欲和活动情况。荷瘤第28d处死小鼠,剥离肿瘤称重,依据公式计算肿瘤生长抑制率,并对肿瘤组织行病理检查。利用流式细胞仪分析荷瘤小鼠脾脏T细胞亚群数量。利用ELISA的方法,检测荷瘤小鼠血清IFN-γ含量。结果:1.经双酶切鉴定,成功提取重组质粒pcDNA3.1-Ag85A和pcDNA3.1-Ag85B。2.成功构建移植性小鼠膀胱肿瘤模型,成瘤率为100%。3.与生理盐水、空白质粒和Ag85A DNA疫苗相比,Ag85B DNA疫苗能够明显抑制肿瘤生长,但其抑瘤作用弱于BCG,差别有统计学意义(P均＜0.01)。Ag85A DNA疫苗组与生理盐水组、空白质粒组比较,差别无统计学意义(P均＞0.05)。4.肿瘤组织行病理检查发现,BCG及Ag85B DNA疫苗组肿瘤组织中细胞坏死明显,瘤体周围及瘤体内有大量炎细胞浸润。在Ag85A DNA疫苗组、生理盐水组和空白质粒组的肿瘤组织中,细胞坏死及炎细胞浸润不明显。5.荷瘤小鼠脾脏T细胞亚群数量检测结果显示,与生理盐水、空白质粒和Ag85A DNA疫苗相比,Ag85B DNA疫苗能够显著提高CD4~+T细胞亚群数量、CD8~+T细胞亚群数量和CD4~+T细胞与CD8~+T细胞的比值,但三项指标均低于BCG组,差别有统计学意义(P均＜0.01);Ag85A DNA疫苗组与生理盐水组和空白质粒组比较,差别无统计学意义(P均＞0.05)。6.荷瘤小鼠血清IFN-γ含量检测结果显示,与生理盐水组和空白质粒组相比,Ag85ADNA疫苗与Ag85B DNA疫苗均能显著促进IFN-γ的分泌,差别有统计学意义(P均＜0.01)。其中Ag85B DNA疫苗组的IFN-γ的水平高于Ag85ADNA疫苗组,但二者均低于BCG组,差别有统计学意义(P均＜0.01)。结论:1.单独应用Ag85B DNA疫苗可以诱导Th1免疫反应,增加IFN-γ等细胞因子的分泌,提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能,抑制肿瘤生长,但效果不及BCG。2.尚不能认为单独应用Ag85A DNA疫苗会诱发有效的抗膀胱肿瘤免疫反应。