浅二度烧伤愈合后局部皮肤常出现色素沉着异常，表现为色素沉着不足或色素过度沉着，且多发生在面部、手部等暴露部位，对患者的外观影响较大。由于对其发生机理还了解不多，因而尚无理想的治疗方法。 体外培养的黑素细胞（MC）移植是近来治疗烧伤后色素沉着不足的一种较好方法，但由于正常人表皮MC数量少，增殖力弱，体外培养常因角朊细胞（KC）或成纤维细胞（Fb）的过度生长而失败，而传统MC培养方法是利用培养液中的添加剂对KC和Fb的抑制作用，如十四烷酰佛波醇乙酯（TPA）抑制KC的生长，基因素（geneticin）抑制Fb的生长，由于这些物质具有较多副作用，尤其TPA是一种强致癌剂，用TPA培养的MC移植治疗烧伤后色素沉着不足时有一定的致癌风险。随着对MC旁分泌调节的研究进展，人们发现碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等生长因子可刺激MC的增殖，由于bFGF是天然生长因子，以bFGF为主要丝裂原培养的MC移植治疗烧伤后色素沉着不足，应比传统培养方法更安全。 目前有关烧伤后色素过度沉着的治疗的研究报道较少，治疗方法不多且效果欠佳。熊果苷对色素增多性皮肤病如黄褐斑、老年斑等有较好疗效，未发现有副作用，但尚未见有用于治疗烧伤后色素过度沉着的报道。同时，由于所使用的黑素细胞系及培养方法的不同，有关熊果苷的作用效果和机理的实验结果差异很大。以bFGF为主要丝裂原进行MC培养，培养环境将更接近MC的体内环境，以利用此方法培养的MC作为模型研究熊果苷的脱色素作用，实验结果对临床应用将更具参考价值。 第四军医大学硕士学位论文 本实验利用 bFGF和霍乱毒素（CT）协同配对，建立正常人表皮 MC的体外选择性纯培养，观察所培养MC的形态和增殖力等生物学特性，摸索传代、冻存及复苏等操作的最佳条件，并初步尝试自体移植利用此系统培养的MC膜片治疗烧伤后色素沉着不足。然后利用这一系统测定熊果昔的脱色素作用，MTT法测定对MC增殖力的影响，以LDoPa为底物测定酪氨酸酶活性，比色法测定黑素合成量，并与临床常用脱色素药物维生素 C磷酸酯（AP）及曲酸的结果相比较，进而初步观察了 5％熊果苦膏剂对烧伤后色素过度沉着的临床防治效果。 实验结果如下：1．利用bFGF／CT成功建立了正常人表皮黑素细胞的体外选择性纯培养，可避免 KC和 Fb的污染，培养成功率约 70％；原代接种密度以 2x10’儿m‘为宜，传代培养时接种密度以 lxl OVcm’为宜；黑素细胞可传代 7～8代，约7周后细胞者化失去增殖能力，细胞可倍增＊次左右，平均群体倍增时间约为一．5天；细胞可耐受液氮冻存，复苏后接种存活率约 60 ％。2．熊果音浓度为 lwt时抑制黑素细胞活力约 7％，在＜0．ling／ml时对黑素细胞无毒性，此时对酪氯酸酶呈浓度依赖性抑制，半数抑制剂量门 ＊约为ling／m！，在叼刀01m g／mg／ml时对酪氨酸酶无抑制作用，浓度0刀ling／ml的熊果昔可使黑素合成抑制 14％。3．曲酸在 ling／ffil和 0．ling／Inl时的细胞活力抑制率分别为 37％和 23％，在 0刀 lmgithlo刀00！m咖l时对细胞活力无影响，AP各浓度对细胞活力均无影响。曲酸在 ling／ttil和 0．ling／nil时酪氨酸酶抑制率分别为 49％和16％，在无细胞毒性的浓度下对酪氢酸酶无抑制，AP仅在 ling／ml时对酪氨酸酶有抑制作用。0刀 ling／ml的曲酸对黑素合成无抑制作用，而0刀 ling／ffil的 AP可抑制 6％。4．培养的 MC细胞膜片自体移植治疗 1例手部烧伤后色素沉着不足，5％ 4 第四军医大学硕士学位论文 熊果昔青剂治疗3例面部烧伤后色素过度沉着，早期效果较好。 实验结果表明，利用bFGF／CT建立正常人表皮黑素细胞的体外选择 性纯培养，具有安全，成功率高，培养条件更接近体内黑素细胞环境的 优点，利用此系统培养的黑素细胞自体移植治疗烧伤后色素沉着不足是 可行的。熊果昔的细胞毒性低，对酪氨酸酶及黑素合成有较强的抑制作 用，5％熊果苦膏剂可作为防治烧伤后色素过度沉着的理想药物。