目的：双微体(double minute chromosomes，DMs)，是一对环状、无着丝粒、约1Mb长的DNA片段，可以在细胞耐药过程中产生；实验组前期工作应用array-CGH技术，分析MTX抗性NIH3T3细胞系中基因扩增的情况，结果显示12个已知基因存在扩增。本研究希望明确这些基因的确切扩增方式，以及确认真正参与双微体形成及MTX耐药的靶分子。　　 方法：以小鼠成纤维细胞NIH3T3以及不同浓度的耐MTX的NIH3T3耐药细胞系作为研究对象，利用FISH、PCR、Real time PCR和Western Blot等方法对上述基因的DNA、RNA和蛋白水平进行检测。　　 结果：结果显示Ankib1、Cdkn2a、CWC22、Gatad1、Krit1、Mdm2、Mterf，Skint3、Skint4、Skint9、Slc35e3和4930511M11Rik共12个基因，在耐药细胞中发生DNA水平扩增；其中CWC22、Skint3、Skint4、Gatad1、Krit1、Mterf和Mdm2等7个基因以双微体形式扩增；在mRNA水平上，Ankib1、Cdkn2a、CWC22、Gatad1、Krit1、Mdm2、Mterf，Slc35e3和4930511M11Rik等9个基因在耐药细胞中转录水平升高；在蛋白水平上，Krit1和Mdm2基因在耐药细胞中发生高表达。　　 结论：所验证的12个基因在耐MTX的NIH3T3细胞中发生高扩增，其中CWC22、Skint3、Skint4、Gatad1、Krit1、Mterf和Mdm2等7个基因通过双微体扩增；Ankib1、Cdkn2a、CWC22、Gatad1、Krit1、Mdm2、Mterf、Slc35e3和4930511M11Rik等9个基因在耐药细胞中存在转录水平升高；Mdm2和Kirt1在蛋白水平发生高表达。