【摘 要】
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目的构建由癌胚抗原启动子(CEA promoter,Cp)驱动的靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,研究癌胚抗原启动子是否能控制CD-TK基因在CEA阳性大肠癌细胞中专一性表达和杀伤
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目的构建由癌胚抗原启动子(CEA promoter,Cp)驱动的靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,研究癌胚抗原启动子是否能控制CD-TK基因在CEA阳性大肠癌细胞中专一性表达和杀伤。方法1.采用PCR分别扩增出Cp、CD、TK三种目的基因并凝胶电泳和DNA测序鉴定2.采用双酶切、连接依次将Cp、CD、TK基因插入pcDNA3.1(-)质粒并凝胶电泳和DNA测序鉴定3.将靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK分别转染CEA阳性的人大肠癌SW480细胞和CEA阴性的Hela细胞,采用RT-PCR检测CD-TK基因的表达4.用MTT法检测转染pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK后的SW480细胞对前药5-Fc和GCV的敏感性。结果1.519bp的Cp基因片段、1310bp的CD基因片段、1129bp的TK基因均克隆正确。2.靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK经凝胶电泳和DNA测序证实构建正确。3.转染了靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK的SW480细胞经过RT-PCR鉴定证实有CD-TK基因的表达,CEA阴性Hela细胞则没有CD-TK基因的表达。4.在细胞培养试验中,转染了靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK的SW480细胞对前药5-Fc和GCV敏感。结论正确构建了靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK。靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK能够使CD-TK基因在CEA阳性细胞中专一性表达,从而达到靶向治疗大肠癌的目的。
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