目的：　　动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是累及大、中动脉内膜的慢性进展性炎症疾病，常造成冠心病、脑卒中等缺血性心血管疾病。动脉粥样硬化的发病机制至今尚未完全阐明。巨噬细胞是斑块中重要组成部分，目前研究认为巨噬细胞在动脉粥样硬化起始、发展的全过程中发挥着重要作用，巨噬细胞与动脉粥样硬化斑块中发生的细胞凋亡、自噬以及炎症反应等均有密切的关系。　　Swiprosin-1是一种新型蛋白，在2004年由瑞士科研人员Vuadens F等首次发现并报道，后续相关报道主要围绕其在淋巴细胞中的作用及其他免疫相关功能的研究。本课题组前期研究发现swiprosin-1表达在主动脉斑块中，而且发现其主要表达在斑块的巨噬细胞中。目前未见swiprosin-1在动脉粥样硬化中作用的相关报道。我们前期研究发现敲除swiprosin-1后巨噬细胞泡沫化程度明显减弱，由于巨噬细胞向泡沫细胞转变是动脉粥样硬化发病的生理基础，对动脉粥样硬化严重程度的调节具有重要作用，因此，我们推测巨噬细胞表达的swiprosin-1在动脉粥样硬化的发生发展中发挥着重要作用。本课题围绕巨噬细胞swiprosin-1在动脉粥样硬化发生、发展中的作用展开研究，并初步探讨其机制，从而为动脉粥样硬化的治疗提供新靶点。　　方法与结果:　　一、Swiprosin-1在动脉粥样硬化斑块中的表达及定位　　1.应用组织切片和免疫荧光标记技术标记swiprosin-1以及巨噬细胞，发现swiprosin-1在斑块中有表达，且与巨噬细胞特异标记物F4/80共定位。　　2.应用免疫荧光技术标记巨噬细胞中的swiprosin-1，免疫印迹技术检测swiprosin-1在巨噬细胞中的表达，发现swiprosin-1主要分布在巨噬细胞的细胞质以及细胞膜上，核中无表达，且在巨噬细胞中的蛋白表达水平很高。　　3.应用免疫印迹方法检测主动脉中内皮层、平滑肌层中swiprosin-1的表达，发现主动脉内皮层和平滑肌层均无swiprosin-1表达。　　二、Swiprosin-1在动脉粥样硬化整体斑块中的表达变化　　1.给予ApoE-/-小鼠高脂饲养，构建动脉粥样硬化动物模型，取其主动脉进行免疫组织化学染色，观察到动脉壁斑块形成，证明整体造模成功。　　2.应用免疫印迹技术对模型组与对照组主动脉中swiprosin-1含量进行检测，发现与对照组相比，动脉粥样硬化组小鼠主动脉中swiprosin-1蛋白表达水平增加。　　三、Swiprosin-1在巨噬细胞泡沫化中的表达变化　　1.Ox-LDL刺激RAW264.7细胞24 h后油红染色，构建巨噬细胞泡沫化模型，发现随着Ox-LDL的浓度由10μg/mL增加到80μg/mL，巨噬细胞泡沫化程度加深。　　2.免疫印迹技术检测不同浓度Ox-LDL(10，20，40，80μg/mL)刺激RAW264.7细胞检测对swiprosin-1表达的影响，发现随着给药浓度的加大，swiprosin-1表达水平上升，在40μg/mL达到峰值。　　3.免疫印迹技术检测Ox-LDL刺激RAW264.7细胞不同时长(0，6，12，24，48 h)对于swiprosin-1表达的影响，结果显示随着刺激时间的延长，swiprosin-1表达水平上升，在24h达到最高。　　4.提取小鼠原代腹腔巨噬细胞，Ox-LDL刺激，进行验证，免疫印迹结果显示swiprosin-1在巨噬细胞泡沫化过程中表达增多。　　四、敲除swiprosin-1对于动脉粥样硬化发展的影响　　将swiprosin-1-/-以及swiprosin-1+/+小鼠骨髓移植入ApoE-/-小鼠体内，前者为模型组，后者为对照组，然后饲以高脂饲料4个月，构建动脉粥样硬化模型。　　1.将模型组与对照组小鼠剥离主动脉纵向剖开，应用油红O染色法对主动脉斑块进行染色，发现swiprosin-1敲除组斑块明显少于对照组。　　2.应用冰冻切片技术横切主动脉组织，油红O染色法对主动脉切片进行染色，结果同样显示swiprosin-1敲除组斑块面积较对照组小。　　3.应用免疫组织化学方法标记动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞，发现与对照组相比，敲除swiprosin-1小鼠动脉粥样硬化造模之后，斑块中巨噬细胞含量减少。　　4.取模型小鼠血清进行血脂检测，发现与对照组相比，敲除swiprosin-1之后，小鼠血清中胆固醇含量降低。　　五、敲除swiprosin-1对于巨噬细胞泡沫化的影响　　分别从swiprosin-1-/-以及swiprosin-1+/+小鼠中提取原代腹腔巨噬细胞，前者作为模型组，后者为对照组。　　1.Ox-LDL刺激造模，应用油红O染色，发现与对照组相比，敲除swiprosin-1的巨噬细胞泡沫化程度降低。　　2.Ox-LDL刺激造模，进行胆固醇检测，发现与对照组相比，敲除swiprosin-1的巨噬细胞胆固醇含量降低。　　3.利用荧光标记检测胆固醇流出，结果显示过表达swiprosin-1之后，巨噬细胞胆固醇流出减少。　　4.检测巨噬细胞对荧光标记氧化型低密度脂蛋白的吞噬，发现敲除swiprosin-1之后，巨噬细胞吞噬脂质功能增强。　　六、Swiprosin-1影响动脉粥样硬化发展可能的机制　　分别从swiprosin-1-/-以及swiprosin-1+/+小鼠中提取原代腹腔巨噬细胞，前者作为模型组，后者为对照组。　　1.应用免疫印迹技术检测巨噬细胞中凋亡相关蛋白的表达，结果显示敲除swiprosin-1之后，促凋亡相关蛋白Bax、caspase3、caspase9含量减少，抑凋亡蛋白Bcl-2表达增加。进而采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒以及TUNEL法检测细胞凋亡情况，结果均显示敲除swiprosin-1之后，巨噬细胞凋亡显著减少(7.93±1.52％ vs0.41±0.12％)。　　2.利用Elisa试剂盒检测血清以及巨噬细胞培养液上清中炎症因子的含量，发现敲除swiprosin-1之后，炎症因子IL-1β、TNF-α水平均出现降低。　　3.应用免疫印迹技术检测自噬相关蛋白表达，发现敲除swiprosin-1之后，巨噬细胞LC3表达上升，P62表达下降，提示巨噬细胞自噬功能可能增强。　　4.应用Transwell迁移技术检测巨噬细胞迁移能力，发现敲除swiprosin-1之后，巨噬细胞迁移能力下调。　　结论:　　1.Swiprosin-1在动脉粥样硬化斑块内的巨噬细胞中高表达，且随着泡沫化程度加重而表达增加;　　2.Swiprosin-1抑制了巨噬细胞对于氧化型低密度脂蛋白的吞噬;　　3.Swiprosin-1抑制了巨噬细胞自噬进程;　　4.Swiprosin-1促进了巨噬细胞凋亡、迁移以及炎症因子的分泌;　　5.巨噬细胞缺失swiprosin-1能够抑制动脉粥样硬化的发生发展。