人子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞的分离及其特性的初步鉴定

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目的:从人子宫平滑肌肉瘤SK-UT-1细胞(SK-UT-1cells)中分离和培养子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞(Uterine leiomyosarcoma stem cell like cells, ULSSCLCs),并对其干细胞特性进行鉴定,以揭示肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)在子宫平滑肌肉瘤发生、发展中存在重要作用。方法:用含有生长因子的无血清培养基(Serum free medium,SFM)悬浮培养SK-UT-1cells,筛选出悬浮球细胞,并将其命名为子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞ULSSCLCs);采用流式细胞技术、有限稀释法、交替在含血清培养基(SSM)和SFM培养基中培养、台盼蓝染色、Transwell小室、流式细胞技术分别检测SK-UT-1cells和ULSSCLCs干细胞表面标志物CD133的表达差异、ULSSCLCs单个细胞成球能力、ULSSCLCs的分化能力、SK-UT-1cells及ULSSCLCs的增殖能力的差异、SK-UT-1cells及ULSSCLCs的体外迁移、侵袭能力以及对不同浓度顺铂作用下的耐药能力的差异。结果:1、SK-UT-1cells能在SFM中形成可以稳定传代的ULSSCLCs,目前已传到第7代。2、在CD133的表达中,ULSSCLCs高于SK-UT-1cells,差异有统计学意义(P<0.05),并且随ULSSCLCs代数增加其表达量增高。3、有限稀释法可以在显微镜下观察到单个细胞成球全过程。4、将SFM中的ULSSCLCs接种于SSM中后可重新贴壁分化,分化后细胞与SK-UT-1cells形态无明显差异。5、在增殖试验中,ULSSCLCs增殖能力强于SK-UT-1cells,差异有统计学意义(P<0.05)。6、ULSSCLCs迁移(215+14个)、侵袭(161±15个)能力显著高于SK-UT-1cells(106±11个).(61±7个),差异有统计学意义(P<0.05)。7、SK-UT-1cells和ULSSCLCs经化疗药物顺铂诱导凋亡48h后,DDP浓度为40μmol/L、80μmol/L、150μmol/L时,SK-UT-1cells凋亡率高于ULSSCLCs,差异有统计学意义(P<0.05)。SK-UT-1cells和ULSSCLCs的周期分布在顺铂处理前无明显差异(P>0.05),两组细胞经顺铂处理48小时之后:处于S期的SK-UT-1cells细胞比例较处理前明显减少(P<0.05), ULSSCLCs处于G2期的细胞比例较处理前明显升高(P<0.05)。结论:1、成功从人子宫平滑肌肉瘤SK-UT-1cells中筛选出ULSSCLCs。2、ULSSCLCs高表达肿瘤干细胞表面标记物CD133、并具有更强的自我更新、多向分化、增殖、迁移、侵袭及耐药能力。
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