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我们进行了以下三方面的工作:1.幽门螺杆菌VacA<+>BCS的制备和生物学活性的初步检测,通过对标准菌株和临床来源菌株进行相关毒力基因vacA和cagA鉴定,选择特定菌株进行液体培养,然后进行培养上清的制备,并对这些上清进行必要的生物学鉴定,结果我们获得了VacA<+> BCS和VacA<->BCS.2.以标准菌株NCTC11637 DNA为模板进行了vacA基因的克隆和表达,成功构建pET-28b(+)/vacA表达质粒,获得了表达蛋白,但表达蛋白未能检测到致细胞空泡化活性.3.幽门螺杆菌VacA<+>BCS对胃上皮细胞基因表达和相关生物学性状的影响,利用表达谱基因芯片技术分析幽门螺杆菌VacA<+>BCS致细胞基因表达谱的改变,以及以基因表达谱结果为线索,研究VacA<+>BCS对细胞结构、功能以及hTERT表达的影响,结果显示发生明显表达差异的基因占基因总数的5﹪左右,其中已经明确功能的表达差异基因几乎涉及所有重要的细胞功能和生命活动,如①VacA<+>BCS作用胃上皮细胞(SGC7901)可引起基因表达调控、信号传导相关基因的差异表达,特别是NF-κB转录活化和信号传导相关因子的表达变化,说明VacA等分泌性毒力因子可能通过该途径引起下游生物学事件的发生,从而最终导致细胞病变.②VacA<+> BCS作用胃上皮细胞(SGC7901)可引起细胞骨架相关蛋白表达的下调,同时,我们通过对细胞结构的观察和研究,证实VacA<+> BCS作用细胞后导致细胞骨架结构变化乃至破坏,并且这种结构的改变对VacA<+>BCS具有时间-剂量依赖的关系.③VacA<+> BCS可导致细胞凋亡相关因子的表达,并且通过电镜和流式细胞仪技术证实了VacA<+> BCS致细胞凋亡作用.④VacA<+>BCS尚可导致肿瘤发生相关基因的表达变化,某些原癌基因表达增加,抑癌基因表达降低,另外利用RT-PCR方法证实VacA<+> BCS作用后可以引起细胞hTERT表达的增加,显示VacA<+> BCS引发细胞恶性转化的潜能.