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植物组织培养中，胚性愈伤组织经长期继代后分化能力能否保持，一直是细胞工程研究中的重要课题。柑橘部分品种的愈伤组织经长期继代后，仍具有很强的体胚发生能力，但也有一些品种的愈伤组织经长期继代后体胚发生能力下降，甚至完全丧失体胚发生能力。从柑橘愈伤组织中克隆控制体胚发生的基因，对于通过基因工程改良品种、提高转化子的再生具有重要意义。对柑橘体细胞胚胎发生的研究，有助于进一步揭示柑橘愈伤组织体细胞胚胎发生的分子调控机理，同时，也有助于进一步提高柑橘愈伤组织离体种质库用于生物技术遗传改良的效率。本研究以暗柳橙的愈伤组织为实验材料，利用RT-PCR方法克隆了CitSERK的cDNA全序列，并对其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行了生物信息学分析。同时，还构建了CitSERK的正义表达载体和反义表达载体，并进行了遗传转化。主要研究结果如下：1．提取了暗柳橙愈伤组织的总RNA，所提取的RNA的A260／A280在1.65-1.90之间，A260／A230大于2.0；其质量和浓度能够直接用于其它分子生物学研究，如RT-PCR及Northern杂交等实验。2．利用RT-PCR方法从暗柳橙愈伤组织中克隆得到CitSERK基因的cDNA全序列，全长1886 bp，并对重组质粒DNA进行了PCR检测和酶切检测。3．利用美国国立生物技术信息中心BLAST程序、ExPASy和Clustal W软件进行分析发现，CitSERK基因与已克隆的其它SERK基因具有很高的同源性，编码621个氨基酸，等电点是5.57，分子量为68-3 kD，是一种疏水性蛋白，并对其氨基酸序列结构进行了分析。4．构建了CitSERK基因的正义表达载体与反义表达载体，同时，对构建的正义表达载体与反义表达载体的重组质粒DNA进行了PCR检测和酶切检测。5．反义表达载体的遗传转化，并获得了一定数量的抗性愈伤组织。