目的：将带有泛素、溶酶体及内质网信号的PRNP真核表达载体作为DNA疫苗免疫小鼠，以期打破机体对朊病毒的免疫耐受，获得较好的体液免疫和细胞免疫反应，为朊病毒病的疫苗性免疫预防提供一定的数据和参考。　　 方法：(1)PRNP及带细胞表达定位信号的PRNP DNA疫苗，瞬时转染HeLa细胞后，使用Western Blot检测蛋白表达特点。(2)采取DNA肌肉注射与重组蛋白腹部皮下注射相结合的疫苗免疫方案，免疫结束后两周，采集小鼠血清、脾细胞，使用ELISA和ELISPOT方法检测血清IgG抗体和小鼠分泌γ-IFN的脾细胞。将4-6周的雌性BALB/c小鼠随机分为6组，7只／组：pcDNA3.1空质粒组，pcDNA3.1-PrP组，pcDNA3.1-UbPrP组，pcDNA3.1-PrPLII组，pcDNA3.1-PrPER组，以上各实验组均进行蛋白增强免疫；另一组为pcDNA3.1不进行蛋白增强的对照组。无菌PBS稀释DNA疫苗至1μg/μ1，小鼠左右腓肠肌注射各50μ1/次，即100μg/次／只。DNA疫苗免疫三次后，实验组小鼠腹部皮下注射原核表达的重组PrP加强免疫两次，每次100μg。每两次免疫间隔两周，最后一次免疫后两周采集小鼠血清、脾细胞，进行免疫学检测。　　 结果：(1)各组质粒转染HeLa细胞后，分别于36小时和48小时检测载体的表达，实验结果显示各组疫苗质粒均能在HeLa细胞中表达，从而在25-35kD处均出现明显的被PrP单抗识别的特异性蛋白条带，且均具有三种糖基化类型，但表达量及蛋白量随时间的变化趋势却不尽相同。pcDNA3.1-PrP表达量最多，且48h时比36h蛋白量增多；pcDNA3.1-UbPrP在36h时表达的PrP以双糖基化为主随时间延长，蛋白降解明显；而pcDNA3.1-PrPLII载体以单糖基化PrP蛋白表达为主，随着时间延长，无糖基化蛋白观察不到，pcDNA3.1-PrPLII载体表达的蛋白与其他组载体相比降解速度快，具有表达时间依赖性。pcDNA3.1-PrPER编码的蛋白双糖基化PrP量较少，而无糖基化形式所占比例明显增加。(2)血清IgG抗体测定D NA疫苗pcDNA3.1-PrP、pcDNA3.1-UbPrP、pcDNA3.1-PrPLII、pcDNA3.1-PrPER、pcDNA3.1免疫3次后，蛋白增强2次，pcDNA3.1对照组不进行蛋白增强。结果显示核酸疫苗pcDNA3.1-PrP、pcDNA3.1-UbPrP、pcDNA3.1-PrPLII和pcDNA3.1-PrPER组均可以诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体，其滴度依次分别达到1：6400、1：6400、1：6400、1：3200。pcDNA3.1组经蛋白增强免疫后，抗体滴度也可达到1：200。以上各组血清均能有效地特异性识别重组全长PrP(3)ELISPOT方法检测细胞免疫反应免疫结束，取小鼠脾细胞，使用PrP23-90、PrP91-231和PrP23-231蛋白刺激，结果发现PrP23-90蛋白刺激pcDNA3.1-PrPER组、pcDNA3.1-PrP组和pcDNA3.1-UbPrP组产生的Υ-IFN细胞数较多，依次为720/106、538/106和482/106。PrP23-231蛋白刺激pcDNA3.1-PrPER组、pcDNA3.1-PrPLII和pcDNA3.1-UbPrP组刺激产生Υ-IFN细胞数依次为483/106、274/106和261/106。而PrP91-231蛋白刺激产生γ-IFN细胞数均小于50/106，提示朊蛋白刺激机体产生细胞免疫的免疫原表位定位于朊蛋白N端23-90aa区间。　　 结论：各种朊病毒DNA疫苗可有效打破机体免疫耐受，使免疫小鼠产生了有效的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应。DNA疫苗与重组蛋白联合免疫，可一定程度提高免疫水平。