香鱼巨噬细胞炎性蛋白-2基因的克隆序列分析及表达

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趋化因子(Chemokines)是一种低分子量(8~10 kDa)、通过免疫细胞产生的细胞因子。它能够趋化白细胞运动,参与免疫及炎症反应中。根据其特征性的结构可以分为4类,分别是CXC、CC、C和CX3C。巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)就是一种典型的CXC型趋化因子,可趋化中性粒细胞到炎症部位,从而使炎症反应得以消除。本文从香鱼巨噬细胞转录组测序中获得 MIP-2基因,阅读框序列长为318个核苷酸,其编码的前体蛋白由105个氨基酸组成、相对分子质量为11.6 kDa。N端19个氨基酸为信号肽序列。氨基酸序列分析表明,香鱼 MIP-2和白斑狗鱼 MIP-2的同源性最高,达54%。与其它鱼类 MIP-2的同源性介于39%~41%之间,与哺乳动物 MIP-2的同源性低于34%。香鱼的MIP-2和其它鱼类中的MIP-2和 IL8、IL8-like等均含有 CXC的结构区域。健康香鱼 MIP-2基因 mRNA主要在脾、肾、脑、鳃中表达,在肝、心、肌肉、肠中表达量次之。实时荧光定量 PCR结果显示,鳗利斯顿氏菌侵染香鱼后,各组织中 MIP-2基因 mRNA表达量均呈上调趋势。尤其以肾组织和肌肉组织中变化最显著,最高值分别为对照组的23和25倍。此后表达量上调趋缓,趋向恢复到对照组表达水平。采用原核表达获得 MIP-2蛋白,免疫小鼠,制备 M IP-2抗血清,免疫印迹验证制备抗血清的效价。本文阐述了香鱼 MIP-2基因表达与鳗利斯顿氏菌的感染密切相关,揭示了在香鱼抗菌免疫反应中,MIP-2可能具有重要的作用。
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