[背景与目的]　　葛根总黄酮是中药葛根的主要有效成分之一，近5年来，课题组研究发现葛根总黄酮(Puerariae radix flavones，PRF)在12.5～200μg/ml对不同急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)细胞株（HL-60、Kasumi-1、NB4和U937）有选择性抑制作用，以NB4细胞最强，并影响上述细胞的细胞周期进程，阻滞细胞于S期，促进细胞凋亡。体内实验证明上述剂量PRF可以延长NB4细胞异种移棺瘤裸鼠的生存周期，抑制移植瘤裸鼠的生存周期、抑制移植瘤瘤体的增长。课题组进一步选用更低浓度PRF（0～50μg/ml）干预NB4细胞，发现较低剂量PRF便能有效抑制NB4细胞株增殖，影响细胞周期进程，阻滞细胞于S期，促进细胞凋亡，同时证明PRF体外诱导NB4细胞凋亡时，JNK蛋白活化，caspase3和caspase8上调，p38MAPK表达下调。在此基础上，本研究以NB4细胞为研究对象，通过JNK抑制剂sp600125阻断JNK信号分子，检测0～50μg/mlPRF对NB4细胞凋亡的影响及JNK下游相关信号分子的变化，进一步验证JNK信号通路在PRF诱导的NB4细胞凋亡中可能的作用或地位　　[方法]　　1、0、10、30、50μg/ml PRF作用于NB4细胞24、48及72小时，MTT法检测NB4细胞的增殖抑制率　　2、0、10、30、50μg/ml PRF作用于NB4细胞48小时，瑞氏染色观察NB4细胞形态学变化　　3、0、10、30、50μg/ml PRF作用于NB4细胞48小时，FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率改变　　4、0、10、30、50μg/ml PRF±10μmol/L sp600125作用于NB4细胞48小时，流式细胞术检测细胞周期进程、线粒体膜电位变化　　5、0、10、30、50μg/ml PRF±10μmol/L sp600125作用于NB4细胞48小时，蛋白印记法检测JNK通路相关蛋白改变　　[结果]　　1、PRF对NB4细胞有增殖抑制作用　　10、30、50μg/mlPRF能够抑制NB4细胞增殖，呈浓度-时间依赖性。PRF干预NB4细胞24、48、72hIC50分别为28.81、17.17、8.33μg/ml。　　2、细胞形态学改变　　0～50μg/ml PRF干预NB4细胞48h，随浓度增加，瑞氏染色示凋亡特征逐渐明显。　　3、细胞凋亡率改变　　0～50μg/ml PRF干预NB4细胞48h，流式细胞术提示早期凋亡率随浓度升高而增加，10、30、50μg/ml PRF组早期凋亡率分别为6.2％、23.1％、37.1％，具有统计学差异。　　4、细胞周期改变　　0～50μg/ml PRF作用于NB4细胞48h后，细胞阻滞于S期，呈典型的凋亡改变。JNK抑制剂sp600125与PRF共同干预NB4细胞48h后，PRF虽仍可影响细胞周期进程，但S期细胞数较单药组减少。　　5、线粒体膜电位改变　　0～50μg/ml PRF作用NB4细胞48h，流式细胞术定性分析提示线粒体膜电位随着浓度升高而降低;JNK特异性抑制剂sp600125与PRF共同干预NB4细胞48h后，较之各PRF单药组，线粒体膜电位升高，较之SP600125单药组，线粒体膜电位随着PRF浓度升高而降低。　　6、PRF影响NB4细胞凋亡相关蛋白表达的检测　　NB4细胞在PRF干预48小时后，随着细胞凋亡的增加，JNK、p-JNK、ERK、Fas、cleaved caspase-3表达上调，p38、Bcl-2、pro-caspase9、pro-caspase3表达下调，而p53在10μg/mlPRF组表达上调，30、50μg/ml组表达下调，cyto-c在10μg/mlPRF组表达下调，30、50μg/ml组表达上调，cleaved caspase-8在10μg/mlPRF组表达下调，30μg/ml组无明显变化，在50μg/ml表达上调，JNK抑制剂sp600125与PRF共同干预NB4细胞48小时后，较之单药组JNK、p-JNK、ERK、p38、p53、Fas、cyto-c、cleaved caspase-8、cleaved caspase-3表达受抑制，Bcl-2表达增加，而pro-caspase3、pro-caspase9在10μg/mlPRF组表达受抑制，30、50μg/ml组表达增加。本研究未检测到p-p53表达。　　[结论]　　较低浓度PRF能有效抑制NB4细胞增殖并诱导凋亡，其机制与MAPKs途径中的JNK信号通路有关。同时，MAPKs途径中的JNK、p38和ERK三条通路间又相互影响相互作用。Fas有可能是PRF诱导NB4凋亡的一个重要分子，Fas的启动依赖于JNK的磷酸化，进一步引起下游caspase级联反应。同时，线粒体途径也参与了PRF诱导NB4细胞凋亡的过程。JNK信号通路并不是PRF诱导NB4细胞凋亡的唯一途径，PRF可不依赖JNK信号分子诱导NB4细胞凋亡。