Sirtuins或沉默信息调节蛋白2(silencing information regulator2, Sir2)类似酶被定义为一个烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖型的组蛋白去乙酰化酶的家族,这个家族基因与能量代谢、氧化状况等密切相关,是细胞中有关寿命的热点基因。大量研究证实Sirtuins在基因沉默、DNA损伤修复、有丝分裂调控及抗凋亡等方面起到了重要的作用。P73作为细胞内一个重要的转录因子,是p53家族中的一员,与抑癌基因p53有着许多的相似点,包括调控的下游靶基因,诱导细胞凋亡,引起细胞周期停滞等。同时其p73缺失小鼠不同于p53缺失小鼠,它不会形成自发性肿瘤,但是存在一些发育缺陷,这表明p73可能在神经和免疫系统的发育中也起到了一定的作用。其本身存在多种剪切体,本文中主要研究的是P73α、p73β。在本文中,为了研究分析p73对于Sirtuins家族成员在转录水平上的影响,我们首先采用了双荧光素酶报告系统进行分析。我们构建了一系列Sirtuins家族基因启动子片段和荧光素酶报告载体相连的重组质粒,将其在293T细胞中表达,我们发现p73的两类主要的异构体P73α、p73β能不同程度的上调Sirtuins家族成员启动子所介导的荧光素酶的活性。为进一步证明此结论,我们选用了逆转录PCR(RT-PCR)方法克隆了人类的Sirtuins家族成员编码序列。我们发现P73α、p73β可以不同程度激活sirtuin家族基因的转录,上调其mRNA水平表达。此后,利用免疫印迹实验,发现在293T细胞中p73的两类主要的异构体P73α、p73β并不能如我们预期所料上调Sirtuins家族蛋白水平。由于p73蛋白内源表达量较少,不易检测。因此我构建了pGEX-4T1-P73α融合质粒,体外纯化蛋白,通过自制抗体的方法解决这个问题。同时,在p73基因的不同位点构建了3个RNA干扰质粒,检测在抑制内源性p73表达情况下,对Sirtuins家族基因的转录、翻译的影响。本文为揭示Sirtuins家族成员与p73的相互作用提供了一些线索,为进一步的深入研究打下了基础。