根癌农杆菌介导亚精胺合成酶基因MdSPDS1的柑橘遗传转化及离体再生

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柑橘是世界上具有重要经济价值的大宗水果。在柑橘的生产过程中,由于冷害、冻害、盐害等环境胁迫的影响,其果实的产量和品质都会明显的下降,人工栽培管理虽然在一定的程度上减少这些伤害,但成效有限。通过育种手段,选育能抵御环境胁迫的优质新品种,是解决这一问题的根本途径。柑橘的遗传转化以其自身的优势,为柑橘新品种育种提供了一条新的途径。 本研究以9个品种的柑橘胚性愈伤及会钱橘、冰糖橙上胚轴切段为试材,采用根癌农杆菌介导法,将亚精胺合成酶基因,转入柑橘,以判定多胺的超量表达对柑橘生长发育及抗逆境能力的影响,为进一步的抗性育种奠定基础。同时,还对柑橘遗传转化高效再生体系的完善进行了探索。研究结果如下: 1.共获得了11种Km抗性柑橘材料:朋娜脐橙、暗柳橙、意大利血橙、冰糖橙、四季橘、墨西哥来檬以及山金柑等7种Km抗性胚性愈伤组织;默科特橘橙、澳洲指橘以及红马叙葡萄柚等3种Km抗性胚状体以及23株转基因金钱橘并移栽至温室中。 2.发现当共培养培养基pH值为5.4时,以金钱橘上胚轴切段为外植体进行遗传转化获得的抗性芽比率最高。以柑橘胚性愈伤组织为外植体进行遗传转化中,基因型对抗性愈伤获得率影响很大:山金柑、朋娜脐橙以及红马叙葡萄柚较易(大于15%);暗柳橙、默科特橘橙以及澳洲指橘居中(5~15%);意大利血橙、四季橘以及墨西哥来檬较难(小于5%)。 3.在形态学上,转基因金钱橘与未转化对照在株形和生长势上差异不明显,但在叶形指数、叶面积、叶色等方面存在微小差异。 4.在经受相同程度的逆境胁迫[(高温(45℃保湿6h)、低温(-6℃冰箱中6h)、高盐(300mmol/L NaCl溶液中6h)以及高渗(20%PEG6000溶液中6h)]下,转基因会钱橘的叶片比未转化对照植株叶片的相对电导率低,转基因植株表现出较强的
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