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本文首先克隆青鳉(Oryzias latipes)的mep50基因,研究mep50在青鳉中的表达模式,最后探究青鳉MEP50与PRMT5的相互作用功能位点。青鳉mep50全长1005bp,编码334个氨基酸残基,含6个WD40重复基序,前三个WD40均以色氨酸-天冬氨酸(W-D)结尾,较为保守。提取青鳉成鱼不同组织和胚胎不同发育时期总RNA,采用半定量PCR和实时荧光定量PCR的方法,得到mep50在青鳉中的表达模式。组织定量结果显示mep50在青鳉脾脏、卵巢的表达量较其它组织分别是差异显著(P<0.05)和差异极显著(P<0.01),由此暗示甲基化在青鳉免疫应答和性别发育方面发挥重要作用。青鳉胚胎不同发育时期定量结果显示mep50在胚胎发育阶段表达量呈现由高变低(原肠胚期后),再由低变高(出苗期)的表达模式,出此推测mep50是一种母源性基因,在卵子形成和胚胎早期发育中发挥重要作用,维持胚胎正常发育直到出苗,在各个组织中持续稳定的表达。青鳉胚胎整体原位杂交证实mep50在早期胚胎中广泛表达；出苗后mep50在眼、脑、鳃、鳍(胸鳍、臀鳍、尾鳍)中高水平表达,进一步验证了mep50在组织器官中的广泛表达的模式。利用酵母双杂交探究MEP50与PRMT5相互作用的功能位点,通过克隆OLMEP50的WD40截短和突变缺失片段,构建pGBKT7双杂交重组载体,与pGADT7-olprmt5共转化酵母AH109菌株,通过报告基因(HIS3, ADE2, LACZ, MEL1)在四缺板(His-Ade-Trp-Met)上筛选阳性菌。结果表明青鳉WD40结构域是OLMEP50与OLPRMT5相互作用的关键区域,青鳉MEP50与PRMT5相互作用最大活性域是OLMEP50的第3个WD40区域。第3个WD40缺失WD双杂交结果证实OLMEP50-OLPRMT5相互作用位点是WD位点,这可能是MEP50-PRMT5相互结合发挥最大活性的关键位点。该研究首次揭示了青鳉MEP50的表达模式及其与PRMT5的相互作用位点,将为研究甲基化调控在发育和免疫方面的作用提供有价值的参考依据。