巨大芽胞杆菌ECU1001环氧水解酶的纯化和固定化研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Nathan_YM
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本文对巨大芽孢杆菌ECIJ1001环氧化物水解酶的生物合成进行了改进,通过调整诱导剂的添加方式使酶的表达量达到了196 U/L.将该环氧水解酶纯化到了单一蛋白条带,并测得该蛋白有两个大小均为39 kDa的亚基组成.使用纯化的环氧水解酶对缩水甘油苯基醚进行了拆分,得到该纯化酶的平均对映选择性E值为37.3.在考察了多种载体后,最终使用大孔DEAE-Cellulose离子交换树脂对该环氧水解酶进行了固定化,得到70%的活力回收.考察了温度和pH等因素对固定化酶的影响,并应用该固定化酶对缩水甘油苯基醚进行了不对称水解的批次反应,在较低的底物浓度下该固定化酶进行10批反应后仍然残余72.4%的活力.根据文献资料设计引物,通过PCR获得了枯草芽孢杆菌中的葡萄糖脱氢酶基因.将该基因插入pET32a(+)构建了pET-GDH质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,得到目标融合蛋白并将目标蛋白进行了一步亲和纯化.
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