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鉴定抗逆基因是柑橘基因工程的关键,本实验室从枳中克隆了一个受低温诱导的基因PtrbHLH,该基因超表达可以提高烟草和柠檬的抗寒能力。为进一步研究其抗寒功能,本研究通过农杆菌介导的遗传转化将PtrbHLH-RNAi基因及PtrbHLH分别转入枳(Poncirus trifoliata L.Raf)和柚(Citrus grandis (Linn.) Osbeck)中,并分析转基因植株的抗寒性。主要的结果如下：1.对PtrbHLH-RNAi基因转化枳再生系做了PCR鉴定,得到30株阳性植株。从中选取5个系和WT进行了半定量表达分析,发现PtrbHLH基因在#5、#7表达量明显低于未转化系。酶活性测定结果表明,#5和#7两个转基因系POD和CAT酶活性低于未转化系。黑暗条件下0℃处理后,从表型上看,#5和#7比对照受低温危害轻；电导率测定结果显示,#5和#7明显高于对照；DAB染色结果显示#5和#7染色深度明显高于未转化系,说明转基因株系积累了较多的H202。低温处理后酶活性测定结果显示,#5和#7POD活性低于未转化系。2.PCR鉴定PtrbHLH基因转化柚株系,获得4个阳性转基因株系,PtrbHLH基因在#2和#17中超表达。黑暗下4℃低温处理后,发现未转化植株的叶片比转基因系(#2和#17)萎蔫严重。电导率测定结果显示,#2和#17明显低于未转化植株,说明前者受低温伤害程度低。DAB染色实验显示#2和#17染色深度低于未转化植株,说明转基因株系积累较少的H202。