磺胺类药物残留快速检测免疫层析试纸条的研制

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为了实现对动物源性食品中磺胺类药物(SAs)多残留的快速检测,本研究研制了一种快速检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸条。研究结果如下:  1.利用本实验室制备的抗磺胺类药物母核结构杂交瘤细胞株经复苏,接种到BALB/C小鼠体内,通过体内诱生产生腹水,经提纯、浓缩后得到了抗磺胺类药物母核结构的单克隆抗体SUL-4,通过SDS-PAGE验证纯化效果理想,其浓度为2.87mg/ml。用混合酸酐法将本实验室合成的磺胺类药物母核结构物(SUL)与人血清白蛋白(HSA)连接制备了不同偶合比的包被抗原SUL-HSA,并经紫外分光光度计扫描图谱鉴定偶联成功。  2.利用抗原抗体高特异性反应和竞争法原理成功研制出了磺胺类药物残留快速检测免疫层析试纸条。检测试剂是包被在金标垫上的胶体金标记的SUL-4单克隆抗体,捕获试剂是包被在硝酸纤维素膜上的SUL-HSA偶联物(检测线)和兔抗鼠IgG(质控线)。用该试纸条检测磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺喹恶啉(SQ)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、磺胺甲噁唑(SMZ)、三甲氧苄氨嘧啶(TMP)8种磺胺药物标准品,根据Biodot TSR3000读条系统测其检测线吸光值(G/Peak-ROD值),以磺胺间甲氧嘧啶为标准曲线计算交叉反应率分别为100%、101%、114%、64%、5.3%、1.9%、6.8%、4.8%,检测灵敏度为10ng/g,对SMM、SMD、SDM标准品检测肉眼判定最低检测限为20ng/g,对SDZ最低检测限为40ng/g。建立了鸡肉、猪肉、鸡蛋、鸡肝、牛奶中磺胺类药物提取方法,根据SMM的标准曲线,计算得到样品中SMM、SMD、SDM回收率在79%-103.3%之间,SDZ回收率在44.8%-61.9%之间,变异系数均小于15%。用本方法与高效液相色谱法(HPLC)及酶联免疫吸附法(ELISA)对来自动物试验的鸡肉和鸡蛋样品进行对比检测,均具有较高的符合率。随机抽取市场上140份鸡蛋样品和100份鸡肉样品,检测出磺胺类药物残留阳性样品1份,弱阳性样品5份。  以上结果表明,本研究研制的免疫层析试纸条能够满足鸡肉、猪肉、鸡蛋、鸡肝、牛奶中磺胺类药物残留检测要求,而且无需借助检测仪器,快速、简便、成本低,15min内即可检测结果,可用于动物源性食品中磺胺类药物多残留半定量分析。  
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