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目的:研究β肾上腺素能受体与多巴胺受体在大鼠结肠粘膜的分布,以及去甲肾上腺素和多巴胺对大鼠结肠粘膜黏液分泌的调节。
方法:采用AB/PAS方法(alcianblue/periodic acid schiffs staining阿利新蓝/过碘酸雪夫染色)检测黏液细胞在结肠粘膜的分布;同时采用免疫荧光组织化学方法观察MUC2(黏蛋白2)及β肾上腺能受体,多巴胺受体在结肠粘膜的分布;用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA法)检测去甲肾上腺素(NE),多巴胺(DA)对结肠黏液分泌的影响:使用6-OHDA模型大鼠观察粘液分泌的改变;Real-time PCR方法检测β肾上腺能受体在大肠结肠粘膜的表达水平;使用免疫荧光组织化学方法和激光共聚焦显微镜观察β肾上腺能受体以及多巴胺能受体与MUC2在结肠黏液细胞的共存情况。
结果:AB/PAS方法显示结肠隐窝部位以及上皮细胞存有大量黏液细胞,内含黏液;免疫荧光组织化学结果显示β1肾上腺素能受体在结肠粘膜有弱表达,β3肾上腺素能受体表达近乎阴性,而β2肾上腺素能受体则表现有很强的免疫反应性,β1和β2mRNA表达相对量与免疫荧光组织化学一致。多巴胺能受体在结肠上皮都有分布,其中多巴胺D2和D5受体分布量最大,主要分布于粘膜上皮以及肠隐窝。去甲肾上腺素可刺激大鼠远端结肠粘膜的黏液释放增加,结肠粘膜组织中黏蛋白MUC2的含量从对照0.19±0.03ng/mg增加到0.52±0.10ng/mg,增加274%,分泌到液体中黏蛋白MUC2的量从对照0.038±0.01ng/mg增加到0.075±0.01ng/mg。多巴胺也可以显著刺激结肠黏液分泌,结肠粘膜组织中黏蛋白MUC2的含量从对照0.19±0.03ng/mg增加到0.49±0.08ng/mg,增加257%,分泌到液体中黏蛋白MUC2的量从对照0.028±0.06ng/mg增加到0.049±0.05ng/mg,增加175%,黏蛋白MUC2主要表达在结肠隐窝的黏液细胞内,且与β2肾上腺素能受体和多巴胺能D5受体有共存。
结论:β2肾上腺素能受体和多巴胺D5受体与黏蛋白MUC2共存;去甲肾上腺素和多巴胺可能通过β2肾上腺素能受体和/或多巴胺D5受体促进结肠黏液分泌。