【摘 要】
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本文运用RNA干扰技术特异性下调KLF6,KLF7,KLF10的表达,并进一步分析靶基因表达下调后的生物学特性上的改变。 本文建立以慢病毒(Lentivirus)为载体的RNA干扰技术,对KLFs
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本文运用RNA干扰技术特异性下调KLF6,KLF7,KLF10的表达,并进一步分析靶基因表达下调后的生物学特性上的改变。
本文建立以慢病毒(Lentivirus)为载体的RNA干扰技术,对KLFs进行表达下调,从而分析Kruppel样因子的生物功能学特性,探讨它们在生物发育和分化等方面的意义。实验方法
本文根据KLFs基因的cDNA序列设计3到4组短片段发夹RNA(shRNA)序列,在将合成的序列克隆进入含U6启动子的DNA质粒载体,通过荧光素酶分析方法,选择最有效和其次有效的短片段发夹RNA,与U6启动子一起,克隆进入Lentivirus转移载体。制作含短片段发夹RNA的Lentivirus,感染细胞,筛选阳性表达的细胞,检测阳性克隆细胞内靶基因的表达下调水平,进而分析其表达下调后的生物功能学改变。
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