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目的:靶向survivin合成反义寡核苷酸并将其转染至survivin表达阳性的人白血病株K562细胞中,研究其对K562细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨凋亡机制。
方法:体外培养人红白血病细胞系K562细胞。针对survivin基因序列,设计合成survivin反义寡核苷酸及错配寡核苷酸,并通过脂质体将其转染至survivin表达阳性的K562细胞中。实验分组:正常对照组、错配寡核苷酸对照组、脂质体对照组、survivin反义寡核苷酸处理组(浓度分别为200、400、600、800、1000nmol/L)。倒置光显微镜观察转染后细胞形态学变化;锥虫蓝拒染法观察survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响;噻唑蓝(MTT)法观察survivin反义寡核苷酸对K562细胞的细胞毒作用,及5-氟尿嘧啶(5-FU)联合survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响,计算各组细胞的生长抑制率,测定IC50;Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察转染survivin反义寡核苷酸以及5-FU联合survivin反义寡核苷酸处理后K562细胞细胞核变化,计算各组细胞凋亡率;激酶活性测定方法检测各组细胞中caspase-3活性;800nmol/Lsurvivin反义寡核苷酸处理K562细胞后,经SDS-PAGE分离蛋白,WesternBlot检测细胞中survivin的表达。
结论:Survivin反义寡核苷酸可抑制K562细胞增殖,提高K562细胞对5-FU的敏感性,下调K562细胞中survivin的表达,通过caspase途径诱导K562细胞凋亡。