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卤地菊(Wedelia prostrata(Hook.et Arn.)Hemsl.)为菊科蟛蜞菊属植物。对蟛蜞菊属植物研究调查表明,其主要含有二萜,倍半萜,黄酮和有机酸等化学成分。二萜尤其是对映-贝壳杉二萜类是蟛蜞菊属植物的主要活性成分,具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌、抗血管生成等生物活性。 本文首先用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三种不同极性的溶剂依次对卤地菊的乙醇提取物进行萃取,初步得到三个萃取部位,对卤地菊石油醚部位进行系统的化学成分研究,采用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析和半制备型高效液相色谱等分离技术对其进行分离纯化。利用现代波谱技术(HR-ESIMS,1HNMR,13C NMR,DEPT,2D NMR等)对分离得到的化合物进行结构鉴定,实验分离鉴定得到了18个化合物。其中的6个萜类化合物通过HSCCC快速分离。参考萜类化合物的HSCCC溶剂体系,结合TLC和HPLC分析以及测定分配系数,筛选出正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水体系作为溶剂系统,并对溶剂系统和流速进行优化,成功应用HSCCC对卤地菊的石油醚部位化学成分快速分离并得到了6种萜类单体。其次,对分离得到的18个化合物的抗肿瘤活性进行检测。通过MTT比色法将分离得到的单体化合物对人肝癌细胞(HepG-2),人子宫颈癌细胞(Hela),人乳腺癌细胞(MCF7),人肺癌细胞(A549)进行体外肿瘤细胞毒性试验。 从卤地菊的石油醚部位中分离纯化得到18个化合物,结构鉴定为:对映-贝壳杉-3α-苯丙酰基-19-酸(3α-phenylpropionoyloxy-ent-kaur-16-en-oic acid,1)、5α-hydroxy-2-oxo-p-menth-6(1)-ene(2)、5,8-epoxynaphtho[2,3-b] furan,2-propenoic acid derivatives(3)、5,8-epoxynaphtho[2,3-b] furan, propanoic acidderivatives(4)、对映-贝壳杉-16-烯-19-酸(ent-kaur-16-en-19-oic acid,5)、对映-贝壳杉-3β-二羟基-19-酸(3β-hydroxy-ent-kaur-16-en-oic acid,6)、对映-贝壳杉-3α-当归酰氧基-19-酸(3α-angeloyloxy-ent-kaur-16-en-oic acid,7)、对映-贝壳杉-3α-巴豆酰氧基-19-酸(3α-tigloyloxy-ent-kaur-16-en-oic acid,8)、对映-贝壳杉-3α-异戊烯酰基-19-酸(3α-senecioyloxy-ent-kaur-16-en-oic acid,9)、3α-angloyloxypterokaurene L3(10)、3α-tigloyloxypterokaurene L3(11)、表木栓醇(epifriedelanol,12)、β-香树脂醇乙酸酯(β-amyrin acetate,13)、苯甲酸(benzoicacid,14)、咖啡酸(caffeic acid,15)、α-亚麻酸(α-linolenic acid,16)、β-谷甾醇(β-sitosterol,17)和木犀草素(luteolin,18)。其中对映-贝壳杉-3α-苯丙酰基-19-酸(1)是新化合物,化合物(2、3、4、9、10和11)为首次从卤地菊植物中分离得到。体外抗肿瘤研究表明,化合物3对HepG-2细胞、Hela细胞、MCF7细胞和A549细胞均具有一定的抑制作用(IC50=2.76μM,9.62μM,5.49μM,4.18μM),化合物4对HepG-2细胞、MCF7细胞和A549细胞有较强的抑制作用(IC50=4.19μM,1.87μM,7.45μM),化合物5对Hela细胞和A549细胞具有较明显的抑制作用(IC50=6.14μM,8.76μM)。化合物13对HepG-2细胞的IC50值为2.47μM,化合物18对A549细胞的IC50值为5.16μM,表明化合物13和化合物18对肿瘤细胞具有一定的选择性。 综上所述,本文通过传统分离方法和高速逆流色谱技术成功实现对卤地菊化学成分的分离制备。对卤地菊化学成分及药理作用进行深入研究,进一步阐明其化学成分和药效的关系意义重大。对分离得到的化合物的细胞毒性研究,表明卤地菊在抗癌活性方面有一定的潜力和研究价值。