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乳腺癌易感基因1(Breast cancer 1,early onset, BRCAI)突变是导致人家族型乳腺癌发生的主要原因之一。但是关于犬BRCA1在乳腺肿瘤发生中的作用,研究尚不深入。在这篇论文中,检测了犬乳腺肿瘤中BRCA1启动子区的突变情况,mRNA和蛋白的表达情况,编码区的突变情况和BRCA1启动子区的甲基化情况。并希望通过这些实验,进一步阐明BRCA1在犬乳腺肿瘤发生中的作用。由于犬BRCA1启动子序列尚没有确定,首先通过生物信息学的方法预测了犬BRCA1基因的启动子序列,随后用启动子活性分析的方法进行验证。研究结果显示,预测的犬BRCA1启动子组的报告基因活性明显高于两个阴性对照组(P<0.01)。为了检测犬乳腺肿瘤中BRCA1启动子区的突变情况,从中国农业大学动物医院获取犬乳腺肿瘤组织样本,根据病理特征将所得的样本分成良性乳腺肿瘤组和恶性乳腺肿瘤组,每组均有15例组织样本,并川10例犬止常乳腺组织作为对照组。通过PCR产物测序,分析了各组组织中BRCA1启动子区的突变情况。启动子测序结果显示,在正常乳腺组织和良性乳腺肿瘤中,均没有检测到启动子区的突变；在恶性乳腺肿瘤中,在启动子区发现一个19959098Cdel的点突变,突变率为46.7%(7/15)。为了检测犬乳腺肿瘤中BRCA1表达的改变,分别通过定量PCR和免疫组织化学的方法,检测上述各组组织中BRCA1基因mRNA和蛋白的表达情况。研究结果显示,在犬的良性和恶性乳腺肿瘤中,BRCA1的mRNA表达量明显低于正常组织的对照组(P<0.05)；BRCA1蛋白的表达量,恶性乳腺肿瘤组明显低于正常乳腺组织的对照组(P<0.05)。为了检测犬乳腺肿瘤中BRCA1编码区的突变情况和启动子区的甲基化情况,分别用PCR产物测序和亚硫酸氢盐测序的方法,检测了上述各组组织中,BRCA1编码区的突变情况和启动子区的甲基化情况。研究结果显示,在正常乳腺组织中,没有检测到BRCA1启动子区发生突变；在乳腺肿瘤组织中,检测到BRCA1编码区的4个突变位点,其中3个为新发现的突变位点。在正常乳腺组织和良性乳腺肿瘤组织DNA样本中,均没有检测到BRCA1启动子区的甲基化；在1例恶性乳腺乳腺肿瘤组织DNA样本中,检测到BRCA1启动子区发生甲基化。综上所述,在犬恶性乳腺肿瘤中,检测到位于BRCA1启动子区的一个高突变率点突变位点。在犬良性和恶性乳腺肿瘤中,BRCA1 mRNA的水平有明显的下调。在犬恶性乳腺肿瘤中,BRCA1蛋白的水平有明显的下调。在犬的乳腺肿瘤中,检测到位于编码区的3个新的点突变位点。在犬的恶性乳腺肿瘤中,检测到BRCA1启动子区发生甲基化。