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目的:建立甘肃黄芩水煎液指纹图谱分析方法,测定黄芩苷和黄芩素含量评价药材质量。并对其进行血清药物化学研究,为筛选确定甘肃黄芩的药效成分奠定基础。
方法:⑴应用Sunfire C18柱,甲醇和0.85%磷酸水溶液进行梯度洗脱,流速为1mL/min,检测波长280nm,柱温为30℃,建立甘肃黄芩水煎液指纹图谱。⑵在建立甘肃黄芩水煎液高效液相色谱指纹图谱的基础上,通过比较甘肃黄芩水煎液、对照品、含药血清和空白血清的HPLC指纹图谱,确定甘肃黄芩水煎液血中移行成分。
结果:⑴精密度、重现性、稳定性试验中共有峰相对峰面积、相对保留时间的RSD均小于3.0%;不同产地甘肃黄芩相似度大于97.0%。黄芩苷和黄芩素的线性范围分别为0.50~1.50μg(R=0.9998)、0.20~1.00μg(R=0.9996),黄芩苷和黄芩素的平均回收率(n=5)分别为97.90%、98.35%,RSD分别为1.12%,0.98%(n=5)。⑵在相同条件下,进行了甘肃黄芩水煎液血清中移行成分的归属研究,通过比较甘肃黄芩水煎液、含药血清和空白血清的HPLC指纹图谱,确定大鼠血中来源于甘肃黄芩水煎液的原形成分及其代谢产物,其中原形成分为1、2、6、7、8号峰。最后,通过对单独给予大鼠黄芩苷对照品进一步确定3、4、5号峰是黄芩苷2号峰的代谢产物。此结果为进一步阐明甘肃黄芩水煎液的药效物质奠定了基础。
结论:该方法简便、实用、可靠,可以作为评价甘肃黄芩药材质量及其制剂体外指纹图谱研究的基础。8个入血成分可能成为甘肃黄芩的体内直接作用物质,对其进行深入的研究,将有助阐明甘肃黄芩的药效物质基础及药效机制。