奥曲肽对人肝癌细胞Huh-7体内外作用的研究

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原发性肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是全世界最常见的恶性肿瘤之一,病死率仅次于胃癌及肺癌,位居第三。在亚洲国家,乙型肝炎病毒感染率高,导致原发性肝癌发病率较高;在西方国家,由于丙型肝炎流行,肝癌发病率也有所增加。外科手术切除是肝癌的首选治疗方法,它能够改善病人生活质量,延长病人生存时间,但大部分肝癌在确诊时已属于晚期,不适合手术治疗,仅有30%-40%的患者能接受手术治疗,即使行手术切除,术后复发率仍然较高。肝移植是治疗早期肝癌的另一种潜在方法,但由于肝脏供体短缺限制了它的应用。对于有大血管侵犯和肝外转移而无法进行手术切除的肝癌,现有的系统性化疗临床效果差,预后不令人满意。肝癌的发生涉及多种生物学因素,尤其细胞凋亡信号通路功能障碍在肝癌形成及转移中具有重要作用。激活细胞凋亡通路并最终活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases)级联反应,对于细胞毒性药物抗肿瘤作用非常关键。生长抑素(somatostatin, SS)是一种环状多肽类激素,它及其类似物在体内具有广泛的抑瘤作用。奥曲肽(OCT)是一种人工合成的生长抑素八肽类似物,近年来的研究证实,能抑制多种肿瘤如结肠癌、胰腺癌等的生长。本研究以人肝癌细胞Huh-7为模型,在体外通过MTT及流式细胞仪分析技术检测了不同浓度梯度的奥曲肽对Huh-7细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响,进一步应用Western blot蛋白检测技术分析其作用机制;在体内以裸鼠为荷瘤载体观察奥曲肽对Huh-7细胞移植瘤生长情况的影响,进一步应用免疫组化技术评价移植瘤瘤体血管形成。目的在体外探讨奥曲肽对人肝癌细胞Huh-7的增殖、周期及凋亡的影响及其作用机制;在体内观察奥曲肽对荷瘤裸鼠Huh-7细胞株移植瘤生长的影响。方法在体外以不同浓度的奥曲肽处理Huh-7细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析仪检测细胞周期和凋亡;Western blot检测Caspase-3蛋白表达;在体内接种Huh-7细胞株的裸鼠连续用药4周,观察荷瘤裸鼠肿瘤生长情况,免疫组化法评价移植瘤瘤体微血管密度(MVD)。结果奥曲肽抑制Huh-7细胞的增殖(P<0.05),10-5mol/L奥曲肽作用24、36h后细胞生长抑制率分别为68.83%和80.33%。奥曲肽可诱导Huh-7细胞的G1期阻滞和细胞凋亡,10-5mol/L奥曲肽处理24h后,Huh-7细胞的凋亡率为55.01%。奥曲肽处理24h后的Huh-7细胞Caspase-3的表达显著增高。每隔4天测量一次两组裸鼠皮下移植瘤长、短径,记录裸鼠皮下移植瘤瘤体体积大小情况。奥曲肽实验组裸鼠皮下移植瘤的平均体积131±60.04mm3,生理盐水对照组裸鼠皮下移植瘤的平均体积206±53.71mm3(p<0.05),差异具有统计学意义。结果表明奥曲肽能明显抑制人肝癌细胞株Huh-7裸鼠皮下移植瘤的生长。免疫组织化学结果显示,奥曲肽用药组MVD低于生理盐水组MVD。表明奥曲肽能够抑制Huh-7细胞株裸鼠移植瘤瘤体的血管生成。结论奥曲肽在体外可显著抑制Huh-7细胞的生长,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡;奥曲肽可能通过启动Caspase途径诱导人肝癌细胞Huh-7的凋亡;在体内奥曲肽抑制肝癌的生长和血管的生成,有望成为肝癌治疗的新药物,改善肝癌的预后。
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