目的:本实验通过硫代乙酰胺(TAA)建立急性肝损伤(ALI)大鼠模型,观察复合益生菌制剂(枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊LCBE)对急性肝损伤的防治作用,利用16S rDNA扩增子测序检测粪便肠道菌群变化、液相色谱质谱法检测血清代谢组学变化,并进行关联性分析,分析防治机制,为其治疗急性肝损伤提供理论依据。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(Nor)、ALI组(TAA)、干预组(TAA+LCBE),每组12只。ALI组及干预组分别以200mg/kg体重剂量的TAA于实验第6、7天对大鼠行腹腔注射制备ALI模型,对照组给予等量生理盐水腹腔注射。同时,干预组从实验第1天至实验结束,给予200mg/kg体重剂量的LCBE灌胃,每天一次,其余两组给予等量生理盐水灌胃,共8天。第9天隔夜禁食后,麻醉状态下腹主动脉取血,应用ELISA法检测ALT、ALB、TBIL反映肝功能,检测D-乳酸反映肠屏障,应用液相色谱质谱法检测血清代谢组学变化及KEGG富集分析;留取大鼠肝脏行HE染色;同时无菌操作下留取结肠远端新鲜粪便行16SrDNA扩增子测序检测肠道菌群变化。并采用Pearson统计学方法对差异菌群及差异代谢物进行相关性分析。结果:1.各组大鼠肝功能变化:与对照组相比,ALI组ALT、TBIL显著升高,ALB显著下降(P<0.05),差异有统计学意义。与ALI组相比,干预组ALT、总胆红素有下降趋势,白蛋白有升高趋势,无显著差异(P>0.05)。2.各组大鼠肠道屏障功能变化:ALI组较对照组D-乳酸显著升高(P<0.05),差异有统计学意义。经LCBE治疗后显著降低(P<0.05),差异有统计学意义。3.各组大鼠肝脏HE染色病理结果:与对照组相比,ALI组肝板结构破坏,部分区域肝细胞可见气球样变、点状及嗜酸性坏死,肝血窦扩张,炎细胞浸润。而干预组肝小叶汇管区少量炎细胞浸润,中央静脉轻度扩张淤血,周围有少量肝细胞点状坏死。4.大鼠粪便16S rDNA扩增子测序结果:4.1 Alpha多样性指数分析提示LCBE治疗可显著增加ALI大鼠肠道菌群多样性,丰富肠道菌群。4.2大鼠肠道菌群分布情况4.2.1门水平物种相对丰度提示,三组大鼠的前5种肠道优势菌门均为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、疣微菌门、放线菌门,但在各组肠道菌群中所占比例仍然存在明显差异。4.2.2门水平差异物种分析提示,与对照组相比,ALI组厚壁菌门增多,拟杆菌门减少(P<0.05);经治疗后,干预组拟杆菌门丰度有所回升,厚壁菌门丰度有所下降(P>0.05)。4.2.3属水平差异物种分析提示,与对照组相比,ALI组丁酸弧菌属、拟杆菌属、Muribaculum、考拉杆菌属、副杆状菌属、另枝菌属丰度均显著下降;Romboutsia菌属及乳酸杆菌属显著升高(P<0.05)。经LCBE治疗后,丁酸弧菌属、拟杆菌属都显著回升,Romboutsia菌属及乳酸杆菌属则显著下降(P<0.05)。5.大鼠血清代谢组学液相色谱质谱研究结果5.1代谢物定量分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析提示三组样品组的代谢物表达组内同质性佳,组间差异显著。5.2差异代谢物分析提示LCBE可纠正ALI时甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、二乙醇胺浓度的显著升高及芥酸、骨化三醇、苯乙尿酸、犬尿喹啉酸、1-甲基组氨酸、氧化三甲胺浓度的显著下降,且纠正后的水平与对照组相比,无显著差异(P>0.05)。5.3代谢通路分析结果提示LCBE调控ALI的代谢物主要参与脂类代谢及氨基酸代谢。6.多组学关联性分析提示LCBE对ALI大鼠1-甲基组氨酸浓度的纠正与丁酸弧菌属及拟杆菌属丰度的升高呈正相关,对芥酸、骨化三醇浓度的纠正与丁酸弧菌属丰度的升高呈正相关。结论:1.TAA所致急性肝损伤大鼠有明显的肝脏组织及功能、肠道屏障受损,而枯草杆菌二联活菌可起到改善作用。2.枯草杆菌二联活菌的早期干预,可使急性肝损伤失衡的肠道微生态趋于平衡,对肠道菌群多样性、有益菌表达、肠道屏障功能及炎症均有良性调节作用。3.甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸等13个差异代谢物可能成为TAA诱导急性肝损伤大鼠的潜在生物标志物;。4.枯草杆菌二联活菌对ALI大鼠血清中关键代谢物具有良性调节作用,主要包括脂类代谢及氨基酸代谢途径相关代谢产物。5.枯草杆菌二联活菌可通过调节部分肠道菌群,使急性肝损伤代谢组学异常趋于正常。