牛副结核病是由副结核分枝杆菌引起的一种慢性肉芽肿性肠炎,以顽固性腹泻、进行性消瘦、肠粘膜增厚并形成皱襞等特征。该病是B类动物疫病,我国已将其归为Ⅱ类动物传染病,属于动物检疫病。本病已广泛流行于世界各国,我国的发病率也呈上升趋势,近年来,规模化牛场已陆续爆发此病,目前该病尚无特效药,严重影响着我国乃至全世界养牛产业的健康发展。目前可供参考的新疆地区牛副结核病相关的流行病学调查的数据较少,本研究通过血清学ELISA检测阿克苏地区6个规模化牛场奶牛副结核病的抗体水平、病原分子生物学检测及分析,了解了奶牛群中MAP的感染情况和病原特征,为本地区奶牛副结核病的防控提供基础数据。试验一阿克苏地区6个规模化牛场奶牛副结核病的血清学调查本研究以阿克苏地区6个规模化牛场(A-F)为场群,采集牛群血样共1 710份,利用爱德士(IDEXX)副结核分枝杆菌血清抗体ELISA检测试剂盒,检测血清抗体。结果显示,6个不同规模化牛场均存在副结核病的感染,总抗体阳性率为4.7%(81/1 710),其中A牛场的抗体阳性率最高,为5.4%(18/333),F牛场的抗体阳性率最低,为3.6%(10/274),说明该地区各牛场之间的抗体阳性率存在差异。将牛群按不同月龄阶段(2-3月龄、4-6月龄、6-10月龄和10-22月龄)和不同胎次(头胎牛产前21天、头胎牛产前60天、经产牛产前21和经产牛产前60天)进行分析,结果显示:不同月龄奶牛的平均抗体阳性率为4.5%(41/905)。其中,2-3月龄(断奶犊牛)的MAP抗体阳性率最高,为6.6%(13/196),10-22月龄(青年牛)的MAP抗体阳性率最低,为3.3%(8/244),说明犊牛最易感;头胎牛和经产牛产前(21、60天)的MAP抗体阳性率为5%(40/805),头胎牛产前21、60天MAP抗体阳性率最高,分别为5.6%(11/198)和5.5%(11/197),头胎牛和经产牛产前21、60天的感染情况有一定差异,说明该病对头胎牛最易感,因此需加强对该病的隔离、预防和管理。试验二阿克苏地区6个规模化牛场奶牛副结核病的病原学检测及分析采集了81头副结核分枝杆菌(MAP)血清抗体检测阳性的奶牛直肠粪便,经沉淀集菌法处理后,抗酸染色、涂片后于光学显微镜(10×100,油镜)下观察,发现背景和其他细菌均为蓝色,分枝杆菌为红色,因此初步鉴定为副结核分枝杆菌。使用天根DNA提取试剂盒,提取抗酸染色筛查有疑似副结核分枝杆菌的奶牛粪便中的DNA,利用副结核分枝杆菌的F57特异性引物及DMC亚型分型鉴定的引物对提取的DNA粪样分别进行PCR扩增,对扩增后有目的条带的样本切胶回收后进行克隆及鉴定,经测序并进行序列分析。结果表明,奶牛副结核分枝杆菌的特异性基因序列F57和亚型分型基因序列DMC的扩增片段大小分别为250 bp、310 bp,与预期大小一致。所测得的序列经过NCBI比对后,发现F57、DMC亚型分型基因与奶牛副结核参考菌株JII-1961等基因的同源性为100%,并对样品(MAP-57、Subtype-MAP)进行构建系统进化树分析,发现其在遗传进化树上具有高度的亲缘性,因进一步确定该菌是Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌,说明调查的规模化奶牛场存在Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌的感染。