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第一部分鼻咽癌Survivin蛋白及mRNA表达与预后分析 目的：探索鼻咽癌组织中凋亡抑制基因Survivin蛋白和mRNA表达及其与鼻咽癌患者预后之间的关系。 方法：分别应用免疫组织化学和原位杂交技术，检测44例鼻咽癌患者活检组织标本Survivin蛋白和mRNA表达量，以30例同期鼻咽慢性炎症患者作为对照。 结果：鼻咽癌患者Survivin蛋白阳性率为79.5％、mRNA阳性率为75.0％，均明显高于对照组（P＜0.01），且Survivin蛋白与mRNA水平具有很好的一致性；两者任何一项高表达的鼻咽癌患者平均生存时间均低于低表达者(P＜0.01)。 结论：Survivin基因的过度表达在鼻咽癌的发生、发展中起重要作用，而且对其预后有重要的临床价值。 第二部分鼻咽癌Survivin基因shRNA干扰研究 目的：构建针对Survivin和CDK1基因的shRNA重组质粒，评估Survivin基因干扰沉默后鼻咽癌细胞CNE2生长抑制情况，基因表达情况。 方法：利用PubMed基因数据库资源，针对Survivin和CDK1基因设计并合成相应shRNA序列，使用基因工程技术构建包含Survivin和CDK1单个基因和串联基因shRNA序列的重组质粒pU6-shRNA。用脂质体介导重组质粒转染到鼻咽癌CNE2细胞，分别用MTT法检测生长抑制情况、流式细胞仪检测细胞凋亡情况、RT-PCR方法检测基因mRNA表达情况。 结果：经测序验证构建的包含Survivin和CDK1单个基因和串联基因 shRNA序列的重组质粒序列正确。重组质粒转染干扰鼻咽癌CNE2细胞后，三组重组质粒的增殖抑制率分别达到26.0%、15.6%、32.5%，均明显高于未转染组和阴性对照组；流式细胞仪检测的细胞凋亡指数分别达到5.4%、4.7%、15.2%，亦高于未转染组和阴性对照组；RT-PCR检测结果显示 pU6-shRNA-Survivin重组质粒所致的 Survivin mRNA表达下调约52.7%、pU6-shRNA-CDK1重组质粒所致的CDK1 mRNA表达下调约56.7%、pU6-shRNA-Survivin-CDK1重组质粒所致的 Survivin mRNA表达下调约82.4%及 CDK1 mRNA表达下调约85.0%。 结论：Survivin基因的干扰沉默能抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖、增加细胞的凋亡及下调mRNA的表达，而联合CDK1基因同时干扰会加强其干扰作用。 第三部分鼻咽癌成瘤裸鼠体内shRNA干扰研究 目的：评估Survivin基因shRNA干扰对鼻咽癌细胞CNE2裸鼠成瘤及其对放疗敏感性的影响。 方法：用腺病毒介导重组质粒瘤内注射方法，观察鼻咽癌 CNE2细胞裸鼠成瘤生长情况，以及成瘤裸鼠单次放疗照射后生长情况。 结果：鼻咽癌CNE2细胞接种裸鼠后成瘤率达100%，肿瘤随着时间不断生长；Ad-shRNA-Survivin、Ad-shRNA-CDK1、Ad-shRNA-Survivin-CDK1重组质粒干扰组肿瘤生长均较非干扰组生长缓慢；单次放疗照射后肿瘤均不断缩小，干扰组肿瘤缩小更为明显，尤以串联组为最。 结论：shRNA重组质粒能够干扰荷瘤小鼠的肿瘤生长、使肿瘤生长减慢；shRNA干扰对放疗敏感性有一定增强。