重组ChIFN-γ基因的表达及油菜的遗传转化

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目前,每年全世界鸡肉消费量约占全部肉制品消费总量的40%,为提供健康的鸡肉,每年要耗费几十亿美元用于饲养和防疫。γ-干扰素具有广谱抗病毒活性和免疫保护作用,在生产上有实际的应用意义。应用植物生物反应器生产IFN蛋白具有天然活性,生产成本低,可以直接口服,避免了后期繁琐的纯化。  缺乏重组ChIFN-γ蛋白及抗ChIFN-γ蛋白的多克隆或单克隆抗体等基础研究试剂,是转ChIFN-γ基因植株蛋白检测分析滞后的主要原因。因此,本研究将ChIFN-γ基因克隆至表达载体pET32a中,并转化E.coliBL21中,1mmol/LIPTG37℃诱导表达12hChIFN-γ表达量达到菌体总蛋白的37%。SDS-PAGE电泳检测表明,ChIFN-γ重组蛋白分子量约为33kDa,计算出ChIFN-γ蛋白分子量为16kDa。本研究为下一步的抗体制备及转基因油菜蛋白检测奠定了基础。  目前本实验室已经建立了比较成熟的油菜农杆菌介导法遗传转化体系。本研究采用种子特异性启动子及相关信号肽,以Genbank数据库鸡干扰素序列为对象,依据油菜密码子偏嗜性人工合成基因,构建pSW-Napin-ChIFN-γ-NOS植物表达载体。采用农杆菌介导法将ChIFN-γ基因(载体为pSW)遗传转化油菜下胚轴、子叶柄。经Kan筛选,获得抗性植株62株。经PCR鉴定,获得5株转化Napin-ChIFN-γ-NOS基因植株。Southernblot检测出2株有杂交信号,均为单拷贝,表明ChIFN-γ基因已整合进了转基因油菜植株基因组中。ELISA定量检测转基因植株ChIFN-γ蛋白,结果表明转基因植株ChIFN-γ蛋白表达量最高达到1120pg/g鲜重。本研究为通过口服喂养转ChIFN-γ基因植株提高鸡体免疫应答能力,达到提高禽病防治效果奠定了基础,为建立干扰素新的生产模型和禽病防治提供实验依据及手段。
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