本研究选择了PRRSV CH-1a株致弱过程中的4个不同代次进行了全基因组序列的测定与分析,并进行了PRRSV CH-1R全长cDNA分子克隆的构建。PRRSV CH-1a致弱过程中的4个代次分别命名为P39,P71,P148和P171,并对这4个代次进行了全基因组序列的测定。应用相关的分子生物学软件对其序列及其编码产物进行了分析。序列测定结果表明,PRRSV CH-1a株致弱过程中4个不同代次的Nsp2蛋白和3’ UTR区域的变异相对较大,尤其是Nsp2蛋白的变异,该蛋白可能具有种属特异性功能,具有耐受碱基插入、缺失和变异的能力。同祖代毒CH-la株相比,4个代次的Nsp2蛋白存在多处核苷酸的改变,同时位于3’UTR poly(A)尾巴的上游的高度保守的八核苷酸序列较祖代毒也发生了改变,该基元序列对RdRp的识别及病毒复制的启动可能起着重要的作用,其生物学意义有待进一步验证。设计并合成了覆盖PRRSV CH-1R株基因组的七对引物,采用RT-PCR方法,分别扩增各基因片段。通过沉默突变引入一个分子标记(Nhe I识别位点)以便于将来区分自然毒株和基因工程毒株。利用限制性内切酶,分别消化各基因扩增片段和pBluescript II SK(+)载体,构建PRRSV CH-1R株基因组的全长cDNA分子克隆(pBl-CH-1R)。采用PCR、限制性内切酶酶切法和基因组测序法对pBl-CH-1R进行鉴定,结果表明已成功构建了PRRSV CH-1R株的全长cDNA分子克隆。它不仅含有PRRSV CH-1R株的全基因组序列,还含有SP6启动子序列和一个分子标记(NheI识别位点)。PRRSV CH-1a的致弱过程中不同代次的全基因组序列的测定和CH-1R株全长cDNA分子克隆的构建,将为深入研究PRRSV的功能基因组学及其致病和变异的分子机制提供材料,还为研制新一代基因缺失疫苗和标记疫苗提供潜在应用前景。