【摘 要】
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端粒酶通过催化端粒合成,保持端粒长度,从而保证细胞的持续分裂能力,其活性与细胞永生化、肿瘤发生等过程密切相关.各种生物中端粒酶均至少由三个单位构成,即RNA模板TR、逆转
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端粒酶通过催化端粒合成,保持端粒长度,从而保证细胞的持续分裂能力,其活性与细胞永生化、肿瘤发生等过程密切相关.各种生物中端粒酶均至少由三个单位构成,即RNA模板TR、逆转录催化亚单位TERT和相关蛋白TLP等.人端粒酶逆转录催化亚单位hTERT的mRNA表达水平与端粒酶的活性有非常明显的一致性,表明hTERT的转录调控是端粒酶活性调节中的限速步骤.hTERT的启动子已经被克隆,其主要调节区为结构简单的看家基因类启动子:无典型的TATA-box结构,富含GC,具有多个Sp1结合位点.近年来已经发现了很多参与hTERT转录调节的相关因子,其中对c-Myc的研究最为充分,Sp1和雌激素也有所涉及.另外,p53、WT1、MZF-2和Mad是已知的对hTERT的转录起抑制作用的因子.但是,肿瘤细胞中hTERT基因表达的详细情形仍不明了.为了分离和克隆参与hTERT转录调控的转录因子,分析其调控的分子机制,并鉴定其对HeLa细胞端粒酶活性的生物学效应,该研究进行了下列实验:1、参与端粒酶催化亚基hTERT转录调控的转录因子的分离和克隆.2、COUP-TFII融合蛋白的原核表达和纯化.3、COUP-TFII融合蛋白与hTERT基因启动子的相互作用.四、COUP-TFII在HeLa细胞中对hTERT转录调控的影响.该研究表明,COUP-TFII作为一个转录抑制因子,通过与hTERT基因启动子相互作用,和c-Myc竞争结合E-box元件,降低人端粒酶催化亚基hTERT的转录并相应抑制HeLa细胞端粒酶活性.初步揭示了COUP-TFII在细胞分化和肿瘤转化过程中的参与途径和调控机制,为开启以端粒酶为靶目标的肿瘤治疗奠定了基础.
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