近年来，频频暴发的鳜流行性疾病对广东省的鳜养殖业造成很大危害。对该流行性疾病的研究表明，其主要病原是传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)。组织浆疫苗对预防鳜ISKNV病有一定的效果，但是材料来源有季节性和数量上的限制，且成本较高，不利于推广，目前还无法获得细胞灭活疫苗和弱毒疫苗，进行基因工程疫苗的研究则可为鳜ISKNV病的预防提供新的思路。研究表明，主要衣壳蛋白（major capside protein, Mcp）是病毒粒子的主要抗原蛋白。本实验克隆了ISKNV Mcp基因；进行了Mcp基因的原核表达；制备了抗重组Mcp的抗血清；构建了重组Mcp基因的DNA疫苗(pcDNAMcp)并对其进行了表达研究。具体研究内容包括： 1 ISKNV Mcp基因的克隆与序列分析 根据鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)主要衣壳蛋白（Mcp）基因序列设计引物，PCR扩增得到一长约1400bp的DNA片段， 将其克隆到pGEM-T Easy Vector。对重组子进行序列测定，测序结果表明所克隆的片段为ISKNV Mcp基因，它含有一个1362bp的开放读码框（ORF），编码454个氨基酸，推算的Mcp分子量为49.665kDa，等电点（pI）为6.01。氨基酸亲水性分析表明，在150-250位氨基酸之间亲水性很高，可能构成主要抗原决定簇。 2 ISKNV Mcp基因的原核表达及重组 Mcp 的免疫原性分析 Mcp基因经PCR改造后克隆至原核表达载体pBV220，构建表达Mcp的大肠杆菌基因工程菌，该工程菌经42℃诱导，SDS-PAGE检测，在约50kDa处有一特异蛋白带，含量约为菌体总蛋白的23％。用纯化和复性后的重组Mcp免疫新西兰大白兔制备抗血清，Western blotting分析显示，重组Mcp制备的抗血清能与ISKNV Mcp特异结合，说明表达产物具有与ISKNV Mcp相似的抗原特性。 3 含ISKNV Mcp 基因的DNA疫苗的构建及其表达研究 利用PCR方法对Mcp基因进行改造，改造后的Mcp基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1+，构建DNA疫苗(pcDNA-Mcp)。将该DNA疫苗肌肉注射鲫鱼，3天后提取注射部位肌肉的RNA, 用RT(Reverse Transcript)－PCR方法可证明Mcp基因在鱼体内的转录；将DNA疫苗转染草鱼肾细胞系（CIK）和鲤鱼上皮瘤细胞系（EPC），经Western blotting检测，Mcp基因在两种细胞中均可表达。这些结果表明该DNA疫苗有望成为预防鳜鱼病毒性传染病的疫苗。