论文部分内容阅读
干扰素IFN-α可以有效的治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)的感染，对人类的生命造成威胁。全世界大约有4亿人感染乙型肝炎病毒(HBV，Hepatitis B Virus)，HBV能引起急、慢性病毒性肝炎，并导致肝纤维化、肝衰竭和肝癌，严重威胁人类的健康。目前，治疗乙肝的药物主要是聚乙二醇化的干扰素和核苷类似物（如拉米夫定，阿德福韦和恩替卡韦）。干扰素alpha是第一个获得治疗乙肝病毒的药物，聚乙二醇化的干扰素能有效治疗25-40％的乙肝患者，联合抗病毒药物能产生更持久的病毒学应答，有效的使HBeAg阳性的患者HBeAg转阴。慢性HBV患者对IFN-α的治疗效果差异很大，机理目前尚不清楚。MircoRNA是一类非编码小RNA，长度一般为19-24个核苷酸，通过互补序列配对与靶基因mRNA的3UTR或者是5UTR相结合，调控靶基因的翻译抑制、脱腺苷化和降解。miR-122是肝脏中特异性高表达的microRNA，占总microRNA含量的70％，对肝脏中脂类代谢、肝细胞生长和肝癌发生、调控HBV和HCV复制等均具有重要的作用。 本研究发现IFN-α在肝细胞中可以诱导miR-122的显著下调，进一步发现IFN-α并不在转录水平引起miR-122的下调，干扰素的刺激基因(ISG) NT5C3的mRNA3，UTR上含有miR-122的的结合位点，其mRNA的3UTR通过结合和捕捉miR-122可以有效的下调miR-122，说明了ISG参与了IFN-α介导的miR-122抑制。通过RNAi抑制IFN-α诱导的NT5C3 mRNA的上调，则IFN-α失去对miR-122的抑制作用，说明IFN-α通过NT5C3调节miR-122的水平。同时，我们发现miR-122可以显著的抑制HBV的表达和复制。我们发现NT5C3与cyclin G1 mRNA通过竞争性地与细胞中的miR-122结合，彼此之间形成竞争性内源RNAs(competitiveendogenous RNAs，ceRNAs)调控关系。最后，当阻止IFN-α诱导miR-122下调后，IFN-α的抗HBV的作用显著增强。因此，我们得出结论，IFN-α介导的miR-122下调在IFN-α的抗乙肝活性中起到了负向调控作用。这些结果可以帮助我们进一步的理解IFN-α的抗病毒的机制，并提出了一个增强IFN-α抗乙肝病毒活性的方向。本研究发现NT5C3 mRNA的3UTR含有miR-122的结合位点，过表达NT5C3可显著降低miR-122的水平及其生物学功能。传统的miRNA和靶基因之间的研究认为miRNA通过与靶基因上识别序列结合，引起mRNA的降解或翻译水平下降。本研究结果显示靶基因反过来也会通过与miRNA结合，通过海绵吸附的原理隔离和抑制与之结合的miRNA，从另一个侧面揭示miRNA-靶基因之间的互作关系。