论文部分内容阅读
目的:研究益智仁挥发油(Oil extract from Alpinia Oxyphylla Miq.fruit,AOFOE)对东莨菪碱诱导的学习记忆障碍小鼠的改善作用,并对其作用机制进行初步探讨,为后续研究提供理论和实验依据。方法:1、AOFOE抗乙酰胆碱酯酶活性和抗氧化活性的研究 通过Ellman法测定AOFOE抗乙酰胆碱酯酶的活性,并采用DPPH法测定AOFOE抗氧化活性的研究。2、AOFOE对学习记忆障碍小鼠的改善作用 KM小鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、益智仁挥发油低剂量组(AOFOE_L组,0.5 mL/kg)、益智仁挥发油高剂量组(AOFOE_H组,1 mL/kg)、盐酸多奈哌齐组(3 mg/kg)。除正常组、模型组的小鼠灌胃蒸馏水外,其余组小鼠均灌胃相应的药物,连续27天,每天1次;自给药第22天起,除正常组的小鼠腹腔注射(ip)生理盐水外,其余组小鼠均ip 3 mg/kg的氢溴酸东莨菪碱溶液,每天1次进行造模,连续ip 6天。在小鼠最后一次造模给药后30 min,采用Morris水迷宫实验观察小鼠行为学变化。水迷宫实验结束后,各组随机取4只小鼠,取大脑进行HE染色,观察海马组织CA1区神经细胞的形态及结构。3、AOFOE改善小鼠学习记忆的机制研究 水迷宫实验结束后,取每组剩余的小鼠,麻醉眼眶取血,保留血清待测;快速在冰块上剥离海马组织,匀浆。检测海马组织中AChE、ChAT活性,检测血清和海马组织中SOD、GSH-Px活性及MDA含量。采用实时荧光定量PCR技术,检测海马组织BDNF、ERK、CREB、BCL-2、BAX的mRNA相对表达量;采用蛋白免疫印迹杂交技术检测海马组织中p-ERK1/2、p-AKT473、cleaved caspase-3的蛋白相对表达量。结果:1、随着浓度的增加,AOFOE对乙酰胆碱酯酶的抑制作用增强,其IC50为25.63μg/ml;随着浓度的增加,AOFOE对DPPH自由基的清除作用也逐渐增强,清除率为50%时AOFOE的浓度为8.523 mg/mL。2、利用东莨菪碱成功诱导学习记忆障碍小鼠模型。Morris水迷宫实验结果显示:与模型组比较,AOFOE_H组和盐酸多奈哌齐组的小鼠逃避潜伏期缩短,在第Ⅲ象限停留时间增加,第Ⅲ象限路程百分比增加,穿台次数增加,首次穿台时间缩短,且游泳路径明显缩短(P<0.05或P<0.01)。HE染色显示,模型组小鼠海马组织CA1区神经细胞的形态不规则,核仁不明显;经药物干预后,AOFOE_H组和盐酸多奈哌齐组小鼠的海马CA1区神经细胞排列较整齐,细胞结构趋于正常。3、与模型组比较,AOFOE_H组和盐酸多奈哌齐组的小鼠海马组织中AChE活性降低、ChAT活性升高(P<0.05或P<0.01);血清和海马组织中SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量降低(P<0.05或P<0.01)。PCR检测显示,AOFOE_H组和盐酸多奈哌齐组小鼠海马组织中BDNF、ERK、CREB、BCL-2的mRNA水平比模型组比较明显提高,而BAX的mRNA水平明显降低;Western blotting检测发现,AOFOE_H组和盐酸多奈哌齐组小鼠海马组织p-AKT473、p-ERK1/2蛋白的表达上调、cleaved caspase-3蛋白的表达下调。结论:AOFOE对东莨菪碱诱导的学习记忆障碍小鼠具有一定的改善作用,其可能的作用机制包括:调节中枢ACh合成酶与分解酶的活性,提高机体抗氧化的能力,上调BDNF、ERK、CREB、BCL-2等基因和蛋白p-ERK1/2、p-AKT473的表达,下调节BAX基因和、cleaved caspase-3蛋白的表达。可能与调节海马神经细胞凋亡有关。