目的:利用分子生物学和细胞生物学技术构建编码乳酸pediocinPA-1基因片段的原核表达载体，诱导表达，鉴定表达产物，并对表达产物进行纯化。为探索天然乳酸pediocinPA-1的生物学活性及应用奠定基础。 方法:根据文献报道的序列设计引物，通过PCR技术特异性扩增PediocinPA-1的成熟肽pedA基因编码片段，并将其克隆入原核表达载体pET-32b(+)中，构建重组质粒pET-32b(+)/pedA。经限制性内切酶kpnⅠ、HindⅢ双酶切鉴定和DNA序列测定后，将重组质粒转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。SDS-PAGE与Westernblot电泳鉴定表达产物，用镍离子亲和层析的方法对表达产物进行纯化。 结果:PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳上显示约1.50bp的条带，与预期大小一致。重组质粒转入大肠杆菌BL21，筛选出阳性克隆，质粒提取后双酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳检测，结果得到两条大小分别为150bp和5.9kb的电泳条带，与pedA基因和pET-32b(+)质粒片段大小相符。大肠杆菌工程菌，在IPTG诱导下表达分子量为19kDa左右的融合蛋白。SDS-PAGE分析显示，表达的蛋白主要以可溶的形式存在于菌体裂解液上清组分中，表达量为25％。用镍离子亲和层析的方法纯化后行SDS-PAGE，目的蛋白呈单一条带，薄层扫描分析证明，纯度达90％。 结论:成功构建了原核表达载体pET-32b(+)/pedA，pedA基因片段编码的PediocinPA-1能在原核细胞中正确表达，用镍离子亲和层析的方法获得纯化的PediocinPA-1。为下一步研究天然pediocinPA-1的生物活性奠定基础。