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蛇毒中含有较多的影响血液系统功能的活性组分,如:凝血酶样酶、解离素、纤溶酶、纤溶酶原激活剂、凝血Ⅹ因子激活剂等,特别是在蝮科和蝰科蛇毒中尤为突出。1993年,张云首次从竹叶青蛇毒中分离纯化出蛇毒纤溶酶原激活剂(TSV-PA),为从蛇毒中开发新型抗栓药物提供新的课题,本课题旨在从江浙产短尾蝮(Gloydius brevicaudus)蛇毒中分离纯化出短尾蝮蛇毒纤溶酶原激活剂(plasminogen activator of Gloydius brevicaudus venom, GBV-PA),并对其理化性质及部分生物学活性进行研究,为寻找较好的抗血栓药物提供实验依据。1. GBV-PA的分离纯化及部分理化性质测定1.1 GBV-PA的分离纯化应用苯甲脒-琼脂糖凝胶(Benzamidine Sepharose 6B)亲和层析,得到两个蛋白峰,经纤维蛋白平板法鉴定第Ⅱ峰有激活纤溶酶原间接溶解纤维蛋白的作用,该组分再过Lichrospher C18 4.6/250反相色谱柱,得到纯品GBV-PA。1.2 GBV-PA的理化性质GBV-PA经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。在β-巯基乙醇还原和非还原条件下,均显示单一条带,即其为单一肽链的蛋白质,分子量为40kDa左右。采用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳测定其等电点(pI)为5.2。2. GBV-PA的生物学活性测定2.1 GBV-PA的比活性采用发色底物法(S- 2390),证明GBV-PA能特异的激活人纤溶酶原为纤溶酶而降解纤维蛋白,且呈现一定的时效和量效关系。经测定其比活性为2.87 t-PA IU/mg。2.2 GBV-PA酶学特性测定GBV-PA活性可被丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)和苯甲脒(Benzamidine)所抑制,而不受金属蛋白酶抑制剂EDTA-Na2影响。说明GBV-PA