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口腔颌面部最常见的恶性肿瘤是口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC),大约占口腔恶性肿瘤的80%以上,舌部又是口腔鳞状细胞癌最多发生的器官。口腔鳞状细胞癌和其他恶性肿瘤一样其主要特点是复发和转移,而肿瘤的无限增殖又是复发和转移的基础。目前,以根治肿瘤的复发和转移,寻找靶向肿瘤干细胞的抗癌策略,已成为许多肿瘤研究学者研究热点。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)理论的提出,我们对肿瘤的认识及治疗进入了一个全新的领域,并推翻了以往对癌症治疗的基本原则。越来越多的有关基因治疗肿瘤方面的研究成果充分说明,针对特殊基因来治疗恶性肿瘤有十分好的应用前景。RNA干扰技术即为此领域研究的突出成果之一,研究者针对特殊基因来治疗恶性肿瘤以达到合成对应siRNA片段的药物,用于肿瘤的基因治疗。p75NTR(p75NTR neurotroph in receptr)低亲和力神经营养因子受体(LNTFR)是分子量为75KDa的细胞表面受体糖蛋白。p75NTR在多种系统肿瘤中的阳性表达已经被发现和证实。其阳性表达量及p75NTR阳性细胞的侵袭特性与肿瘤预后有着密切的联系,多数学者已将p75NTR列为评估肿瘤预后的诊断指标。我们通过前期的研究发现,p75NTR在口腔舌鳞状细胞癌中都有阳性表达,并证实p75NTR阳性细胞具有干细胞增生分化的特性。因此有必要进一步研究p75NTR在舌鳞癌细胞增生或凋亡中的作用及其作用机制,特别是在分子水平研究p75NTR诱导舌鳞癌细胞增生或凋亡的分子机制,发现p75NTR诱导舌癌细胞凋亡通路,描绘凋亡通路的一系列化学反应,明确p75NTR在这一系列化学反应链条中的位置及其上下游反应的衔接因子,这将会为彻底根治舌癌,寻找靶向肿瘤干细胞的抗癌药物具有重要的意义。目的在生物学分子水平探求p75NTR介导口腔舌鳞癌细胞凋亡或增生可能的分子机制通路,为针对特殊基因来治疗舌鳞癌,寻找靶向肿瘤干细胞的抗癌药物提供可能的理论依据。方法1.舌鳞癌细胞的培养及p75NTR阳性细胞分选RPMI-1640培养基,在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中常规培养舌癌细胞系Tca8113细胞。采用流式细胞分选技术于Tca8113鳞癌细胞中分选出p75NTR阳性细胞,倒置显微镜下观察细胞的形态及活性情况。2.采用siRNA干扰技术下调p75NTR蛋白在舌鳞癌细胞的表达根据人p75NTR基因(CD271GenBank Accession Number:NM-002507)的序列,共选择2个位点设siRNA。将分选培养的p75NTR阳性细胞分为空白组、阴性组和实验组进行siRNA转染,48h后采用流式细胞仪测定转染效率；然后采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染色标记法检测各组舌鳞癌细胞凋亡的变化；最后应用real time-PCR检测各组p75NTR mRNA的干扰效果,并用western blot技术检测p75NTR蛋白表达。3western blot检测转染后各组舌鳞癌细胞BcL-2基因蛋白的表达变化。4.细胞免疫荧光标记法观察核内因子NF-κB在细胞内的分布特点。结果1.成功下调p75NTR蛋白表达以后实验组的鳞癌细胞凋亡率比对照组的舌鳞癌细胞的凋亡率明显增加,反向表明p75NTR有促进舌鳞癌细胞增殖的功能。2.通过细胞免疫荧光法观察发现NF-κB在对照组细胞质内分布较少,细胞核内较多,而实验组细胞质内NF-κB明显多,细胞核内NF-κB少。3.Western blot方法检测发现在实验组舌鳞癌细胞凋亡增加时BcL-2表达增加。结论1.p75NTR能促进舌鳞癌细胞增生分化或抗凋亡作用,p75NTR在舌鳞癌细胞中有着“正向”的生物效应。2.p75NTR促进舌鳞癌细胞增生分化或抗凋亡的分子机制可能是通过激活NF-κB通路实现的。3.下调p75NTR引起舌鳞癌细胞凋亡中BcL-2蛋白不参与促进细胞凋亡,此时BcL-2对舌鳞癌细胞起保护作用。