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目的:研究巨噬细胞Coronin-1的表达与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:1.构建过表达Coronin-1的质粒pEGFP-C1-Coronin-1,并将其转染至RAW264.7细胞,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Coronin-1高表达细胞株(RAW264.7-Cor.Plus)。2.构建干扰Coronin-1表达的质粒pGenesil-1-Coronin-1,并将其转染至RAW264.7细胞,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Coronin-1低表达细胞株(RAW264.7-Cor.Minus)。3.将表达不同水平Coronin-1的三组细胞(空白RAW264.7细胞组、RAW264.7-Cor.Plus组和RAW264.7-Cor.Minus组)分别以完全培养基(空白处理对照)、饥饿、雷帕霉素、环孢素A等因素处理后,通过RT-PCR法检测Beclin-1基因的转录水平,Western-blot法检测Beclin-1、 Coronin-1、LC3BⅡ/LC3BⅠ的蛋白表达水平。结果:1.经双酶切及测序鉴定,Coronin-1过表达质粒和siRNA质粒均构建成功;经G418加压筛选后获得了表达绿色荧光蛋白的稳定转染株,通过RT-PCR法和Western-blot法检测该细胞稳定筛选株具有过表达或抑制表达Coronin-1的特性。2.空白处理三组细胞,Western-blot法检测LC3BⅡ/LC3B Ⅰ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;Western-blot法检测Beclin-1:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;RT-PCR法检测Beclin-1转录水平,趋势同Western-blot。差异均具有统计学意义(P<0.05)。3.饥饿处理三组细胞,Western-blot法检测LC3BⅡ/LC3B Ⅰ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组<RAW264.7组<RAW264.7-Cor.Plus组。差异均具有统计学意义(P<0.05)。4.雷帕霉素处理RAW264.7细胞,其Coronin-1蛋白被显著抑制;雷帕霉素和环孢素A分别处理RAW264.7-Cor.Plus细胞,其LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明显较空白处理照组高。差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.本研究探索了高、中、低三种Coronin-1表达水平对巨噬细胞非Mtb源性自噬的影响。结果表明,巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬具有相关性。2.在营养充足状态下,巨噬细胞Coronin-1的表达可抑制细胞自噬;雷帕霉素可通过抑制Coronin-1的表达而促进细胞自噬。3.在饥饿状态下,巨噬细胞Coronin-1的表达可促进细胞自噬。4.巨噬细胞Coronin-1对非Mtb源性细胞自噬的调控可能与mTOR和钙离子信号通路有关。